Čo robí etanol pri extrakcii DNA?

Vedci môžu rozložiť alebo sekvenovať DNA na jej základné nukleotidy, ktoré napríklad môžu človeku povedať, či má genetické ochorenie. Bežné metódy extrakcie DNA zahŕňajú použitie izopropanolu alebo etanolu v jednom kroku procesu. Bunky však obsahujú mnoho ďalších molekúl, ako sú proteíny a lipidy, a vedci prirodzene chcú získať čo najčistejší roztok DNA.

Metódy extrakcie DNA zvyčajne zahŕňajú niekoľko krokov: bunky je potrebné rozbiť, je potrebné odstrániť lipidové membrány a DNA oddeliť od proteínov, RNA a ďalších kontaminanty. Dva typické protokoly sú alkalická lýza na extrakciu bakteriálnej plazmidovej DNA a extrakcia fenol-chloroformom. V obidvoch spôsoboch je jedným z posledných krokov zrážanie nukleových kyselín etanolom alebo izopropanolom. Akonáhle je DNA alebo RNA vyzrážaná (vypadne z roztoku), môže byť resuspendovaná vo vode.

Etanol je dobré rozpúšťadlo

Etanol aj izopropanol dobre miešajú (sú miešateľné s vodou), majú však nižšie dielektrické konštanty ako voda, To znamená, že ich schopnosť chrániť pozitívne a negatívne náboje v roztoku a udržiavať ich oddelené je veľa chudobnejší. Napríklad dielektrická konštanta pre vodu je 78,5, zatiaľ čo konštanta pre etanol je 24,3. DNA je negatívne nabitá, takže je priťahovaná k pozitívnym iónom v roztoku, ako je draslík alebo sodík. Etanol má horšiu schopnosť ako voda udržiavať pozitívne nabité ióny a DNA od seba.

instagram story viewer

Etanol zvyšuje koncentráciu DNA

Etanol tiež robí DNA menej rozpustnou z iného dôvodu. Pretože molekuly etanolu môžu vytvárať interakcie nazývané vodíkové väzby s molekulami vody, znižujú počet molekúl vody, ktoré sú k dispozícii na hydratáciu DNA. Medzi týmto účinkom a nižšou dielektrickou konštantou spôsobí etanol v zásade agregáciu DNA s pozitívnymi iónmi v roztoku, pričom na dne skúmavky vytvorí pevnú látku alebo zrazeninu. Precipitácia DNA slúži na to, aby bola koncentrovanejšia, pretože sa súčasne nezrážajú ďalšie kontaminanty v roztoku.

Ďalšie faktory v procese

Etanolový výplach tiež slúži na odstránenie nízkomolekulárnych kontaminantov, ako sú soli a detergenty. Zvolená soľ sa môže líšiť v závislosti od toho, či je potrebné vyzrážať detergent dodecylsulfát sodný (SDS) z predchádzajúceho kroku; napríklad dodecylsulfát draselný je nerozpustný a bude sa zrážať, takže použitím octanu draselného v alkalickej lýze je možné odstrániť SDS pred pridaním etanolu / izopropanolu. Etanol sa môže tiež použiť na vyzrážanie RNA z rovnakých dôvodov, aj keď vyzrážanie RNA bude zvyčajne vyžadovať viac etanolu.

Teachs.ru
  • Zdieľam
instagram viewer