Klonovanie TA je jednoduchá a pohodlná metóda subklonovania produktov polymerázovej reťazovej reakcie (PCR). „TA“ je skratka pre „tymín“ a „adenín“. Táto technika klonovania využíva schopnosť tymínu hybridizovať s adenínom v prítomnosti ligáz. Na rozdiel od tradičnej metódy subklonovania sa nepoužívajú reštrikčné enzýmy. Namiesto toho sú produkty PCR amplifikované pomocou Taq polymerázových enzýmov.
Metóda
Metóda klonovania TA využíva aktivitu terminálnej transferázy určitého previsu určitej deoxyribonukleovej kyseliny na každý koniec produktu PCR.
Na klonovanie tohto produktu PCR do plazmidového vektora sa použije linearizovaný klonovací vektor s jednoduchými, tromi prevismi prime-T (3'-T) nazývaný T-vektor. Produkt PCR sa zmieša s týmto vektorom vo vysokom pomere.
K zmesi sa pridá DNA ligáza (T4 ligáza), čo umožňuje hybridizáciu a spojenie dvoch produktov.
Výhody a nevýhody
Klonovanie TA je pohodlná metóda subklonovania produktov PCR v linearizovanom vektore a je oveľa jednoduchšia a rýchlejšia ako tradičné metódy subklonovania. Pretože táto metóda nepoužíva reštrikčné enzýmy, môžu sa klonovať produkty bez miest s reštrikčnými enzýmami.
Nevýhodou je, že klonovacie súpravy TA sú veľmi drahé, a preto je ich použitie obmedzené. Okrem toho neexistuje žiadne smerové klonovanie; takže pravdepodobnosť klonovania v opačnom smere je väčšia.
Klonovacie súpravy TA
Niekoľko výrobcov predáva súpravy na klonovanie TA. Niektoré sú Invitrogen, QIAGEN a Premier Biosoft.
