Химики используют высокоэффективную жидкостную хроматографию или ВЭЖХ для разделения смесей соединений. Как правило, метод заключается во введении пробы в колонку, где она смешивается с одним или несколькими растворителями. Различные соединения адсорбируются или «прилипают» к колонке в разной степени; и когда растворитель проталкивает соединения через колонку, один из компонентов смеси выйдет из колонки первым. Прибор обнаруживает соединения на выходе из колонки и создает хроматограмму, состоящую из графика, показывающего время удерживания по оси x и интенсивность сигнала от детектора по оси y. Когда соединения покидают колонку, они дают «пики» на хроматограмме. В общем, чем дальше друг от друга и чем уже пики на хроматограмме, тем выше разрешение. Ученые считают, что разрешение 1,0 или выше представляет собой адекватное разделение.
Измерьте ширину двух соседних пиков на хроматограмме, отметив, где значения оси x находятся у основания каждого пика. Ось абсцисс представляет время удерживания, обычно измеряемое в секундах. Таким образом, если пик начинается на 15,1 секунде и заканчивается на 18,5 секунде, его ширина составляет (18,5 - 15,1) = 3,4 секунды.
Определите время удерживания, отметив время, то есть положение на оси x, которое соответствует положениям максимумов пиков. Это значение обычно будет примерно посередине между двумя значениями, используемыми для расчета ширины на шаге 1. Например, в примере, приведенном на шаге 1, максимум будет равен примерно 16,8 секунды.
Рассчитайте разрешение R между двумя пиками следующим образом:
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0,5 (W_1 + W_2)}
где RT1 и RT2 представляют собой времена удерживания пиков 1 и 2, а W1 и W2 представляют собой ширину пиков, взятых у их оснований. Продолжая пример из шагов 2 и 3, один пик показывает время удерживания 16,8 секунды и ширину 3,4 секунды. Если второй пик показал время удерживания 21,4 секунды при ширине 3,6 секунды, то разрешение было бы:
R = \ frac {21,4-16,8} {0,5 (3,4 + 3,6)} = 1,3
Вещи, которые вам понадобятся
- Хроматограмма ВЭЖХ
- Калькулятор