Ученые используют проточную цитометрию, чтобы различать разные типы клеток или микроскопических организмов. Это инструмент, который используется во многих приложениях, таких как медицинская диагностика или судебно-медицинская экспертиза. Хотя эту экспериментальную технику довольно легко реализовать, анализ полученных сложных данных с помощью проточного цитометра сложнее из-за множества экспериментальных факторов и / или цитометра параметры. Таким образом, цитометрические данные обычно визуализируются и анализируются с использованием сложных профессиональных программ, таких как CELLQuest или FlowJo. Знакомство с методами проточной цитометрии, оборудованием и программным обеспечением необходимо для понимания результатов, полученных с их помощью. эксперименты.
Уточните цель эксперимента, спросив: «Какой вопрос или гипотеза исследуется?» Это будет требуется для корректировки необработанных результатов до соответствующего формата и настроек для дальнейшего анализа с использованием статистической цитометрии программное обеспечение. Внесите необходимые изменения, чтобы данные отображались с соответствующими настройками (например, положительные клетки, отрицательные ворота, интенсивность флуоресценции, популяции клеток и т. Д.).
Найдите ворота. Клетки можно сгруппировать или просто наблюдать сгруппированными вместе на графике плотности или контурной диаграмме. Группы часто разделяются в зависимости от их идентичности. Если одна группа очень интенсивно окрашивается на конкретный маркер или антитело, делается вывод, что все члены этой группы имеют идентичность определенного типа клеток, которые экспрессируют этот маркер. Обычно обнаруживают клетки, которые являются положительными более чем по одному из этих маркеров, и эти клетки обычно являются промежуточными и обозначаются как «дважды положительные».
Посмотрите на диаграммы рассеяния. То, как группы ячеек распределены на диаграмме рассеяния, является показателем размера ячеек. Ячейки с очень большим или высоким разбросом обычно являются большими ячейками; однако они могут быть большими просто потому, что содержат высокую долю цитоплазмы, или могут быть высокими из-за очень большого ядра. В зависимости от исследуемой биологии, это, конечно, будет широко варьироваться в зависимости от эксперимента.
Посмотрите на числа. Отрегулируйте графики для отображения различных параметров на одной оси (обычно оси X), сохраняя подсчеты на оси Y. Это указывает на долю популяции выборки, которая положительна по этому конкретному параметру, как пик обычно наблюдается в положительно окрашенном образце, которого нет в отрицательном контроле. образец.
Посмотрите на гистограммы с несколькими параметрами. Регулируя ось X и ось Y, чтобы каждая из них представляла отдельный параметр, который был исследованные в ходе эксперимента, можно получить более глубокое понимание свойств образца. Например, установив по оси X красную флуоресценцию, а по оси Y - зеленую флуоресценцию, можно вычислить ворота в виде квадранта для образец, чтобы показать четыре области квадранта, в которых клетки присутствуют и окрашены либо на красную, либо на зеленую флуоресценцию, оба цвета или на отсутствие на все. Это позволяет разделить неоднородный образец на его составные части, а любые перекрывающиеся объекты можно визуализировать, а также количественно оценить.
Рекомендации
- «Анализ данных проточной цитометрии»; Сьюзан Шарроу; 1991
- «Проточная цитометрия: приборы и анализ данных»; Марвин Ван Дила; 1985
- «Протоколы проточной цитометрии»; Тереза и Роберт Хоули; 2004
об авторе
Палмер Оуён имеет степень магистра международного бизнеса Калифорнийского университета в Сан-Диего и степень магистра в области международного бизнеса. Бакалавр социологии Калифорнийского университета в Санта-Барбаре. биолог. Он был писателем-фрилансером с 2006 года. Помимо писательского мастерства, он является постоянным трейдером Форекс и интернет-маркетологом.
Фото Кредиты
RF / Polka Dot / Getty Images