Вычисление титра вируса - это сложный способ сказать, что ученый подсчитывает количество вирусов в конкретном образце. Чтобы рассчитать титры вирусов, ученые заражают планшеты с растущими бактериями вирусными растворами с различной концентрацией и подсчитать количество вирусов в исходном растворе, подсчитав количество бактерий, погибших из-за вируса. инфекционное заболевание.
Наденьте перчатки, наполните 10 пробирок с культурами 9 мл бульона и пометьте их «10 ^ -1», «10 ^ -2», «10 ^ -3» и так до «10 ^ -10». Эти пробирки будут использоваться для серийных разведений вирусов, используемых для расчета фага. титр. Поскольку вирусы могут расти до невероятно высоких концентраций, вам необходимо разбавить их, чтобы эффективно подсчитать. Каждая пробирка представляет собой десятикратное разведение вируса.
Возьмите 1 мл смешанной культуры из пробирки с меткой «10 ^ -1» и перенесите ее новой пипеткой в следующую пробирку с меткой «10 ^ -2». Также перемешайте эту трубку.
Продолжайте эту схему, чтобы создать серию серийных разведений. У вас получится 9 пробирок по 9 мл и 1 пробирка по 10 мл. Вирусная нагрузка в ваших пробирках будет разбавлена от 10 раз (ваша первая пробирка) или 100 раз (ваша вторая пробирка) до десяти миллиардов раз (ваша последняя пробирка).
Добавьте в агар две капли бактериальной культуры и осторожно перемешайте. Это бактерии, которые будут убиты, что позволит вам подсчитать количество вирусных частиц в конкретном растворе.
Добавьте 1 мл каждого серийного разведения в соответствующую пробирку с агаром, пока пробирки все еще находятся в бане с горячей водой. Например, 1 мл вашего серийного разведения 10 ^ -1 должен попасть в пробирку с агаром с надписью «10 ^ -1».
Перемешайте каждую пробирку, а затем перелейте каждую пробирку в чашку Петри с соответствующей этикеткой. Это создаст тонкий слой агара, засеянный бактериями и вирусами в каждой чашке. Дайте чашкам вырасти в инкубаторе на ночь.
Выньте свои чашки из инкубатора и осмотрите их. Вы должны увидеть по всей тарелке непрозрачные участки, на которых выросли бактерии, за исключением небольших прозрачных пятен, называемых бляшками. Эти бляшки представляют собой пятна мертвых бактерий, и каждая бляшка представляет собой один вирус.
Возьмите количество бляшек на своей тарелке и умножьте на 10. Если вы насчитали 157 бляшек, то получили бы 1570.
Умножьте число, полученное на предыдущем шаге, на число, обратное числу на вашей пробирке для разведения. Например, если вы выбрали тарелку 10 ^ -5, умножьте 1570 на 10 ^ 5, чтобы получить 157000000. Это окончательное число - ваш титр фага и представляет количество вирусов на мл вашей исходной культуры.