Клонирование ТА - простой и удобный метод субклонирования продуктов полимеразной цепной реакции (ПЦР). «ТА» - это сокращение от «тимин» и «аденин». Этот метод клонирования использует способность тимина гибридизоваться с аденином в присутствии лигаз. Рестрикционные ферменты не используются, в отличие от традиционного метода субклонирования. Вместо этого продукты ПЦР амплифицируют с использованием ферментов полимеразы Taq.
Метод
В методе клонирования ТА используется терминальная трансферазная активность определенной дезоксирибонуклеиновой кислоты, выступающей на каждом конце продукта ПЦР.
Для клонирования этого продукта ПЦР в плазмидный вектор используют линеаризованный вектор клонирования с одним, тремя выступами прайм-T (3'-T), называемый T-вектором. Продукт ПЦР в большом количестве смешивается с этим вектором.
К смеси добавляется ДНК-лигаза (лигаза Т4), что позволяет двум продуктам гибридизоваться и соединяться.
Преимущества и недостатки
Клонирование ТА - удобный метод субклонирования продуктов ПЦР в линеаризованном векторе, который намного проще и быстрее, чем традиционные методы субклонирования. Поскольку в этом методе не используются рестрикционные ферменты, можно клонировать продукты без сайтов рестрикционных ферментов.
Недостатком является то, что наборы для клонирования ТА очень дороги и, следовательно, их использование ограничено. Кроме того, нет никакого направленного клонирования; так вероятность клонирования в обратном направлении больше.
Наборы для клонирования TA
Несколько производителей продают наборы для клонирования ТА. Некоторые из них - Invitrogen, QIAGEN и Premier Biosoft.
