Агар - желеобразное вещество, получаемое из очищенных клеточных стенок красных водорослей. Его добавляют в микробиологические среды, которые представляют собой материалы, на которых микроорганизмы выращиваются в лабораториях, чтобы придать веществу более прочную структуру. Агар не имеет питательной ценности, поэтому, когда ученые используют его для культивирования микроорганизмов, они добавляют различные питательные вещества, чтобы увеличить рост бактерий в чашках Петри или пробирках. Когда исследователи хранят бактерии в пробирке, это называется скошенным агаром, потому что жидкая питательная среда затвердевает, когда пробирка находится в наклонном положении. Закручивающаяся крышка на скосе предотвращает высыхание агара.
Среда для наклонных поверхностей готовится иначе, чем для чашек Петри. Стерилизация проводится агаром в пробирках; Чашки Петри предварительно стерилизуют перед заливкой в них стерилизованного агара. Отмерьте необходимое количество воды и налейте его в колбу Эрленмейера. Нагрейте его на плите, пока он почти не закипит. При необходимости добавьте другие ингредиенты и постоянно помешивайте смесь, пока они не растворится. Эти ингредиенты могут включать говяжий экстракт, пептон и pH-буферы, в зависимости от типа культивируемых микроорганизмов.
Перед добавлением порошка обезвоженного агара смешайте его с небольшим количеством холодной дистиллированной воды, чтобы предотвратить комкование. Будьте осторожны при добавлении агара в горячую жидкость, так как он может пениться и переполнять горшок. Добавляйте небольшое количество агара за один раз и перемешивайте, чтобы агар равномерно распределился. Выключите огонь, когда смесь начнет пар, до того, как она закипит.
Поместите непокрытые пробирки на штатив для пробирок. Заполните пробирки, перенеся из емкости около 5 миллилитров - около 0,17 унции или 1 чайную ложку - расплавленного агара с помощью стерильной пипетки. Неплотно закрывайте каждую пробирку, потому что агар не будет стерилизован, если они будут плотно закрыты. Стерилизуйте все пробирки в автоклаве примерно 25 минут при 121 градусе Цельсия или 250 градусах Фаренгейта.
Когда агар еще горячий, осторожно наклоните штатив, удерживая пробирки на твердой поверхности или толстая книга, убедившись, что среда внутри пробирок находится под наклоном относительно теста трубки. Дайте среде остыть и затвердеть под этим углом, что увеличивает площадь поверхности агара. После того, как агар остынет, закройте пробирки крышками. Скосы готовы к использованию после затвердевания агара. Их можно хранить при комнатной температуре или в холодильнике впрок.
Засейте скошенный участок путем переноса клеток с помощью инокуляционной петли от микроорганизма с одной колонией на планшете на поверхность скошенного участка. Переместите петлю по поверхности уклона и закройте трубки. Инкубируйте наклонную поверхность до появления признаков роста, затем поместите пробирку в холодильник.