Один из классических способов определения концентрации микробов в образце - разбавить образец, выращивать микробы на чашках и подсчитывать колонии. Микробы в чашках растут из колониеобразующей единицы, состоящей из одной или нескольких клеток, в видимую колонию, которую можно увидеть и подсчитать. Бактерии - это наиболее распространенные микробы, которые можно оценить с помощью подсчета на чашках. Подсчет колоний используется для обнаружения и подсчета микробов в почве, воде и продуктах питания. Протоколы подсчета колоний подчеркивают точный и методичный подход.
Разведение образцов, посев и инкубация
Если вы просто намажете образец микроба на чашке с агаром, вы увидите так много колониеобразующих единиц, что отдельные колонии будут смешиваться вместе, что сделает невозможным их подсчет. Чтобы решить эту проблему, смешайте образец с жидкой средой, возьмите небольшое количество этой смеси и дополнительно разбавьте ее. Повторите этот процесс шесть-десять раз. Распределите последнее разведение на чашке с агаром и инкубируйте его в течение четырех-семи дней перед подсчетом колоний.
Ручной подсчет
Основная хитрость в подсчете колоний - это один раз подсчитать каждую точку колонии. Один из подходов - установить чашку Петри на фоне сетки и подсчитать колонии в каждой ячейке сетки, последовательно перемещаясь по всем ячейкам. Маркировка подсчитанных колоний на обратной стороне чашки Петри также может быть полезным подходом. Как правило, вам нужно будет насчитать не менее трех тарелок; Используйте только чашки, содержащие от 30 до 300 колоний, чтобы делать надежные выводы, предлагает Microbiology Network, фирма, которая предоставляет консультационные услуги лабораториям и производителям. Чашки с колониями, которые слишком многочисленны для подсчета, или со слишком малым количеством колоний, необходимо повторно засеять из нового разведения.
Автоматический подсчет
Человеческая ошибка увеличивает время, затрачиваемое на подсчет колоний вручную. Чтобы повысить точность и эффективность, поместите чашку Петри в устройство для автоматического подсчета колоний. Автоматические счетчики колоний делают изображение чашки, отделяют колонии от фона и затем используют алгоритм для подсчета колоний на чашке. У алгоритмов могут возникнуть трудности с дифференциацией колоний, когда две или более колонии соприкасаются краями, поэтому это область постоянной разработки программного обеспечения.
Усложнение подсчета
Точность расчета плотности микробов по подсчету колоний имеет некоторые ограничения. Колониеобразующие единицы могут быть одной клеткой, цепочкой клеток или целым скоплением клеток. Предполагается, что колония представляет собой одну клетку, поэтому концентрации, рассчитанные на основе подсчета колоний, могут быть низкими. Разным микробам нужны разные условия роста, и колонии на планшете представляют только те микробы, которые процветают на этой питательной среде в этих условиях инкубации. Кроме того, подсчет колоний не регистрирует мертвые клетки, что является важным соображением, когда вам нужна концентрация клеток в исходном образце.