Electroforeza pe gel este o metodă utilizată în laboratoare pentru măsurarea și sortarea firelor de ADN. Este necesar, deoarece ADN-ul în condiții normale este prea mic pentru a fi manipulat, chiar și atunci când este privit folosind majoritatea microscopelor. Laboratorul de electroforeză pe gel utilizează o procedură relativ simplă și aceeași tehnică de bază poate fi utilizată și pentru separarea proteinelor individuale.
Gel Matrix
Pentru a începe procedura de electroforeză pe gel, trebuie mai întâi să creați gelul. De obicei, gelurile sunt fabricate în foi subțiri folosind o substanță numită agaroză. Pudra de agaroză este plasată într-un balon, urmată de o soluție de apă sărată numită tampon. Acest amestec de agaroză și tampon este încălzit până când cele două substanțe se topesc împreună, apoi se toarnă într-o matriță de formare. Un dispozitiv numit pieptene este plasat apoi la un capăt al matriței înainte ca gelul să se răcească. Când gelul este răcit, pieptenul este îndepărtat, lăsând mici fante care vor fi folosite pentru a ține probe de ADN.
O caracteristică specială a amestecului de agaroză răcit (numită matrice de gel) provine din faptul că este creat cu apă sărată. Când este electrificată, matricea va deveni conductivă, permițând curentului electric să curgă de-a lungul lungimii sale. O altă proprietate specială a matricei de gel este prezența găurilor microscopice regulate. Aceste găuri vor permite șirurilor de ADN să călătorească prin matricea de gel și să faciliteze procesul de sortare.
Camera de electroforeză
Următorul dvs. pas este să creați o cameră de electroforeză. Aceasta este o cutie mică dreptunghiulară, cablată cu o conexiune electrică pozitivă și negativă la ambele capete. Camerele sunt de obicei puțin adânci, suficient de mici pentru a se potrivi pe o masă și sunt construite din materiale clare precum Plexiglas.
Soluția de apă sărată este turnată în fundul camerei de electroforeză, iar matricea de gel este scufundată ușor în această soluție. Apa sărată are două scopuri: ajutarea fluxului de energie electrică și menținerea matricei gelului umedă. Deoarece ADN-ul este propulsat de o sarcină negativă, plasați matricea astfel încât probele dvs. să fie amplasate lângă conexiunea electrică negativă.
Pregătirea ADN-ului
Probele de ADN sunt apoi preparate. Deoarece ADN-ul în soluție este aproape imposibil de văzut, un agent de colorare numit tampon de încărcare este adăugat la fiecare probă individuală. Acest agent îngroșează, de asemenea, soluția de ADN, făcând-o mai puțin curgătoare și mai funcțională. Folosind o pipetă, transferați o probă de soluție de ADN în fiecare fantă alternativă din matricea de gel. În fanta goală dintre fiecare probă, așezați o soluție de ADN a cărei lungime o cunoașteți deja (numită standard ADN) pentru controlul experimentului și comparație.
Porniți alimentarea
Acum, porniți camera de electroforeză. Sub putere negativă, probele de ADN vor fi forțate pe toată lungimea camerei. Catene mici de ADN se vor mișca mai repede prin matricea de gel și, într-un timp scurt, se vor separa de catene mai lungi și mai lente. Vopseaua din agentul de colorare vă permite să urmăriți urmele ADN-ului. Nu veți putea vedea firele individuale de ADN, dar firele de aceeași lungime se vor aglomera.
Pașii finali
Când ADN-ul este sortat, matricea este îndepărtată din camera de electroforeză. ADN-ul este apoi colorat pentru a permite măsurarea și examinarea mai ușoară.
