Oamenii de știință folosesc citometria în flux pentru a face diferența între diferite tipuri de celule sau organisme microscopice. Este un instrument utilizat în multe aplicații, cum ar fi diagnosticul medical sau patologia criminalistică. În timp ce această tehnică experimentală este destul de ușor de realizat, analiza datelor complexe produse prin citometru de flux este mai dificil din cauza factorilor experimentali multipli și / sau citometru parametrii. Ca atare, este obișnuit ca datele citometrice să fie vizualizate și analizate folosind programe profesionale sofisticate precum CELLQuest sau FlowJo. Este necesară familiarizarea cu tehnicile de citometrie în flux, mașinile și software-ul pentru a înțelege rezultatele produse de acestea experimente.
Clarificați scopul experimentului întrebând: „Care a fost întrebarea sau ipoteza care a fost investigată?” Asta o să fie necesare pentru a ajusta rezultatele brute la formatul și setările adecvate pentru o analiză ulterioară utilizând citometria statistică software. Efectuați modificările necesare pentru ca datele să fie afișate cu setările relevante (de exemplu, celule pozitive, porți negative, intensitatea fluorescenței, populații de celule etc.).
Găsește porți. Celulele pot fi grupate sau pur și simplu observate grupate împreună pe un grafic de densitate sau o diagramă de contur. Grupurile se separă adesea în funcție de identitatea lor. Dacă un grup se colorează foarte intens pentru un anumit marker sau anticorp, se concluzionează că membrii acelui grup au toți identitatea tipului de celulă specific, care exprimă acel marker. Este obișnuit să se găsească celule care sunt pozitive pentru mai mult de unul dintre acești markeri, iar aceste celule sunt de obicei un intermediar și notate ca „dublu-pozitive”.
Uită-te la scattergraphs. Modul în care grupurile de celule se răspândesc într-un grafic de împrăștiere este o indicație a dimensiunii celulelor. Celulele cu dispersii foarte mari sau mari sunt de obicei celule mari; cu toate acestea, pot fi mari pur și simplu pentru că conțin o proporție mare de citoplasmă sau pot fi mari pentru că au un nucleu foarte mare. În funcție de biologia investigată, acest lucru va varia, desigur, între experimente.
Uită-te la cifre. Reglați graficele pentru a afișa diferiți parametri pe o axă (de obicei axa X), păstrând în același timp numărul pe axa Y. Aceasta indică proporția populației eșantion care este pozitivă pentru acel parametru particular, ca a vârful va fi observat în mod normal într-un eșantion colorat pozitiv, care va lipsi de la controlul negativ probă.
Uită-te la histograme cu parametri multipli. Prin ajustarea axei X și axa Y la fiecare reprezintă un parametru diferit care a fost investigat în timpul experimentului, este posibil să se obțină o înțelegere mai profundă a proprietăților a probei. De exemplu, setând axa X pe fluorescență roșie și axa Y pe fluorescență verde, porțile în stil cadran pot fi calculate pentru eșantion pentru a arăta patru regiuni ale unui cadran în care celulele sunt prezente și colorate pentru fluorescență roșie sau verde, ambele culori, sau niciuna la toate. Acest lucru permite divizarea unui eșantion eterogen în părțile sale componente și orice entități care se suprapun să fie vizualizate și cuantificate.
Referințe
- „Analiza datelor de citometrie în flux”; Susan Sharrow; 1991
- „Citometrie de flux: instrumentarea și analiza datelor”; Marvin Van Dila; 1985
- „Protocoale de citometrie în flux”; Teresa și Robert Hawley; 2004
Despre autor
Palmer Owyoung deține un Master of Arts în afaceri internaționale de la Universitatea California din San Diego și un Licențiat în Arte în sociologie de la Universitatea din California din Santa Barbara și este un specialist în formare moleculară biolog. Este scriitor independent din 2006. În plus față de scris, el este un comerciant Forex cu normă întreagă și un comerciant pe internet.
Credite foto
Polka Dot RF / Polka Dot / Getty Images