Principalul motiv pentru care colorați un specimen înainte de al pune sub microscop este să aruncați o privire mai bună, dar colorarea face mult mai mult decât să evidențiați contururile celulelor. Unele pete pot pătrunde în pereții celulari și pot evidenția componentele celulare, iar acest lucru îi poate ajuta pe oamenii de știință să vizualizeze procesele metabolice. Petele ajută, de asemenea, la distincția dintre celulele vii și cele moarte. Mai mult, colorarea permite oamenilor de știință să numere numărul de celule de un anumit tip dintr-o anumită biomasă. Există douăzeci sau mai multe tipuri diferite de pete și fiecare își are scopul său.
TL; DR (Prea lung; Nu am citit)
Scopul principal al colorării este de a evidenția celulele și părțile celulelor. Există peste 20 de tipuri diferite de pete, iar tipul de pete pe care îl utilizați depinde de ceea ce căutați.
Tipuri de pete
Alegerea petei depinde de ceea ce căutați. Nu toate petele sunt potrivite pentru celulele vii, dar cele care includ maro Bismarck, roșu toluen, albastru de Nil și roșu de Nil și anumite fluorescente utilizate pentru a evidenția ADN-ul. Unele pete evidențiază sporii, unele detectează lipidele și proteinele, iar altele își schimbă culoarea în prezența amidonului. Scopul examinării determină cel mai bun tip de pată de utilizat. De exemplu, un medic care efectuează un frotiu PAP ar folosi Eosin Y. Este un colorant fluorescent acid care devine roșu atunci când intră în contact cu celulele roșii din sânge, citoplasma și membranele celulare. Este, de asemenea, utilizat pentru a testa măduva de sânge.
În unele cazuri, un investigator poate folosi mai mult de o pată. De exemplu, hematoxilina este o pată care transformă nucleii celulelor în albastru. Atunci când este utilizat împreună cu eozina, care transformă celelalte părți ale celulei în roșu sau roz, oferă un contrast mai puternic și face nucleele mai ușor de diferențiat. Frotiurile PAP și probele de măduvă sanguină sunt mai ușor de examinat atunci când aceste două pete sunt utilizate împreună.
Gram's Stain: Muncitorii din spitale folosesc pata Gram pentru a identifica bacteriile dăunătoare. Acesta este de fapt o serie de coloranți care au efecte diferite asupra diferitelor tipuri de bacterii și oferă medicilor un instrument important de diagnosticare. Pata lui Gram este un proces din trei părți. În primul, se adaugă violetul de cristal al lui Hucker, care colorează toate bacteriile de o culoare violet uniformă. În etapa următoare, se adaugă pata de iod, ceea ce face ca culoarea să adere la celulele Gram-pozitive, care sunt în principal Stafilococ și Streptococ. Pata este spălată, lăsând celulele Gram-pozitive cu o culoare violetă distinctă; apoi se introduce o a treia pată, Safranina O, pentru a spori contrastul dintre bacteriile Gram-negative și restul materialului din lamă.
Procedura de colorare
Când pregătiți un specimen pe o lamă, îl puteți monta la uscat sau umed, îl puteți tăia într-o secțiune subțire sau îl puteți unge. Când utilizați o pată, procedura obișnuită este să montați umed specimenul, ceea ce înseamnă să așezați o picătură de apă pe lamă, așezați specimenul în apă și acoperiți-l cu un slip de acoperire. Apoi, aplicați pata pe un colț al diapozitivului cu un picurător și permiteți să fie trasă spre specimen prin acțiune capilară. Ajută să puneți un prosop de hârtie pe partea opusă a toboganului pentru a atrage apa. Odată ce pata s-a răspândit pe întreaga lamă, specimenul este gata pentru examinare.