Bulionul de nutrienți lichizi este folosit pentru cultivarea bacteriilor, cum ar fi Escherichia coli. Rețetele pentru acest bulion variază în funcție de specia bacteriană și de prezența modificărilor genetice, de exemplu, rezistența la antibiotice. Bulionul poate fi solidificat prin adăugarea de agar, care permite bacteriilor să formeze colonii distincte, în timp ce în cultura lichidă ele se dispersează pur și simplu pe tot volumul. Aceasta este o tehnică de bază, dar esențială pentru metode avansate, cum ar fi clonarea genelor sau testele microbiologice. Acest articol presupune că tulpinile standard de laborator Escherichia coli urmează să fie cultivate pe plăci de agar (sau plăci Petri) de bulion Luria (LB).
Se cântăresc 10 grame de triptonă bacteriană, 5 grame de extract de drojdie, 5 grame de clorură de sodiu, 15 grame de agar sau agaroză și 1 mililitru de hidroxid de sodiu 1N. Se amestecă cu un volum de apă sterilă distilată și autoclavată până se obține 1 litru de mediu. Autoclavează mediul în sticle sau flacoane cu capac mic, timp de 25 de minute. Se lasă să se răcească la aproximativ 50 de grade Celsius înainte de a adăuga reactivi care vor fi distruși la căldură mare, cum ar fi antibiotice sau alte suplimente nutritive.
Lăsați mediul în autoclav să se răcească la 50 de grade Celsius și să nu fie mai mic de 45 de grade Celsius, deoarece agarul se va așeza în recipientul său înainte de a putea fi turnat. Obțineți vase Petri sterile și turnați suficient pentru a acoperi întreaga suprafață a plăcii și cel puțin jumătate din adâncimea acesteia. Evitați umplerea excesivă a plăcilor și, de preferință, nu permiteți agarului să intre în contact cu marginea superioară a vasului. Lăsați plăcile să se solidifice într-un mediu steril (de exemplu, sub o capotă cu flux laminar) lăsând capacele oprite și într-un colț al capotei.
Uscați plăcile. Deși plăcile pot fi folosite imediat ce sunt fixate, o anumită umiditate va fi prezentă pe suprafața agarului, ceea ce va împiedica coloniile bacteriene să adere suficient. Prin urmare, cel mai bine este să uscați plăcile înainte de a aplica bacterii, de exemplu lăsându-le să stea la temperatura camerei pentru câteva zile sau pentru o jumătate de oră sub o capotă cu flux laminar sau la 37 de grade Celsius incubator.
Păstrați farfuriile. Plăcile uscate ar trebui să fie stivuite cu capul în jos (inversate) pe capace și readuse la originalul lor ambalaj, închis cu bandă și fie înfășurat în folie pentru a fi protejat de lumină, fie într-un aparat adecvat container. Scrieți întotdeauna data preparării pe plăci și evitați utilizarea în cazul în care plăcile au mai mult de 2 luni.
Referințe
- „Protocoale actuale în biologia moleculară”; Karen Elbing și Roger Brent; 2002
sfaturi
- Efectuați cât mai mulți pași de mai sus (de preferință pe toți) într-un mediu steril (de exemplu, sub un flacără deschisă sau o capotă cu flux laminar) pentru a opri pătrunderea și creșterea contaminanților bacterieni din aer mass-media.
Despre autor
Palmer Owyoung deține un Master of Arts în afaceri internaționale de la Universitatea California din San Diego și un Licențiat în Arte în sociologie de la Universitatea din California din Santa Barbara și este un specialist în formare moleculară biolog. Este scriitor independent din 2006. În plus față de scriere, el este un comerciant Forex cu normă întreagă și un comerciant pe internet.
Credite foto
Jupiterimages / Comstock / Getty Images