Una dintre modalitățile clasice de a determina concentrația microbilor dintr-o probă este diluarea probei, creșterea microbilor pe plăci și numărarea coloniilor. Microbii placati cresc dintr-o unitate formatoare de colonii formata din una sau mai multe celule intr-o colonie vizibila care poate fi vazuta si numarata. Bacteriile sunt cel mai frecvent microb care se evaluează folosind numărul de plăci. Numărul de colonii este utilizat pentru detectarea și numărarea microbilor din sol, apă și alimente. Protocoalele de numărare a coloniilor subliniază o abordare precisă și metodică.
Diluarea probelor, placare și incubare
Dacă purtați pur și simplu o probă de microb pe o placă de agar, veți vedea atât de multe unități care formează colonii, încât coloniile individuale se vor amesteca, făcându-le imposibil de numărat. Pentru a rezolva această problemă, amestecați proba într-un mediu lichid, luați o cantitate mică din acel amestec și diluați-o în continuare. Repetați acest proces de șase până la 10 ori. Răspândiți diluția finală pe o placă de agar și incubați-o timp de patru până la șapte zile înainte de a număra coloniile.
Numărare manuală
Principalul truc în numărarea coloniilor este să numeri fiecare punct de colonie o dată. O abordare este de a seta placa Petri pe un fundal de grilă și de a număra coloniile din fiecare celulă de grilă, deplasându-se într-un model metodic prin toate celulele. Marcarea coloniilor numărate pe spatele vasului Petri poate fi, de asemenea, o abordare utilă. În general, va trebui să numărați cel puțin trei plăci; folosiți doar plăci care conțin 30 - 300 de colonii pentru a face inferențe solide, sugerează Rețeaua de microbiologie, o firmă care oferă servicii de consultanță laboratoarelor și producătorilor. Plăcile cu colonii care sunt prea numeroase pentru a fi numărate sau cu prea puține colonii trebuie replacate dintr-o nouă diluție.
Numărare automată
Eroarea umană se adaugă la timpul implicat în numărarea manuală a coloniilor. Pentru a îmbunătăți atât precizia, cât și eficiența, plasați vasul Petri într-un dispozitiv automat de numărare a coloniilor. Contoare automate de colonii iau o imagine a vasului, separă coloniile de fundal și apoi folosesc un algoritm pentru a număra coloniile de pe placă. Algoritmii pot avea dificultăți în diferențierea coloniilor atunci când două sau mai multe colonii se ating la margini, deci aceasta este o zonă în curs de dezvoltare software continuă.
Facerea numărării mai complicată
Precizia calculului densității microbilor din numărul de colonii are unele limitări. Unitățile care formează colonii pot fi o singură celulă, un lanț de celule sau un întreg grup de celule. Presupunerea este că o colonie reprezintă o celulă, astfel încât concentrațiile calculate din numărul de colonii pot fi scăzute. Diferenți microbi au nevoie de condiții de creștere diferite, iar coloniile de pe placă reprezintă doar acei microbi care prosperă pe acel mediu de creștere în acele condiții de incubație. În plus, numărarea coloniilor nu înregistrează celule moarte, un aspect important atunci când aveți nevoie de concentrația de celule din eșantionul original.
