Cromatografia lichidă de înaltă performanță (HPLC) este o tehnică de laborator utilizată pentru separarea și identificarea compușilor. Este un tip de cromatografie pe coloană care se bazează pe diferite polarități ale compușilor dintr-o soluție pentru a le separa. HPLC diferă de cromatografia standard pe coloană, deoarece folosește presiunea pentru a forța soluția prin coloană mai rapid și, prin urmare, produce rezultate mai rapide și, uneori, mai precise. Scopul este de a separa compușii din coloană și de a le scoate separat.
Datorită vitezei HPLC și dependenței de polarități diferite ale compușilor, doi compuși cu structura și polaritățile similare pot ieși din aparatul de cromatografie în același timp sau aproape la fel timp. Aceasta este cunoscută sub numele de coeluție. Coeluția face dificilă determinarea exactă a porțiunii amestecului eluat în ce moment.
HPLC folosește de obicei o coloană de sticlă umplută cu margele realizate din diferite materiale. Amestecurile care sunt forțate prin coloană au substanțe chimice care se leagă cu mărimi diferite cu mărci. Puterea legării, care depinde de similaritatea în polaritate, determină cât timp se va lega substanța chimică de talon înainte de a fi eliberat. Unii compuși se leagă atât de puternic încât, în esență, nu sunt eliberați niciodată de margele din coloană și nu sunt niciodată măsurați în soluția care iese din coloană.
Tehnicile tipice de separare în laborator implică dezvoltarea unui test sau metodă de separare și apoi implementarea testului pentru separarea compușilor individuali de o soluție. Cu toate acestea, acest lucru duce de obicei la mai multe soluții care trebuie să fie supuse procedurilor, ceea ce duce la o creștere exponențială a complexității. Deși HPLC poate simplifica și accelera adesea acest proces, costul dezvoltării unui aparat HPLC poate deveni extraordinar. Dezvoltarea unui aparat HPLC, deși este mult mai eficientă, este mult mai costisitoare decât dezvoltarea altor teste pentru separarea compușilor. Acest lucru face ca aceasta să nu fie viabilă din punct de vedere financiar pentru multe laboratoare mici proprietate privată.
HPLC nu este utilizat numai pentru separarea compușilor simpli, ci este, de asemenea, utilizat pentru izolarea proteinelor specifice dintr-un amestec celular. În acest caz, mărgelele din coloană sunt de obicei acoperite cu un anticorp specific proteinei pe care trebuie să o colectați. Proteinele leagă anticorpii și soluția rămasă este trecută prin coloană, apoi proteinele sunt eliberate folosind o altă soluție și colectate. Acest lucru necesită un tehnician înalt calificat care să monitorizeze coloana în orice moment și să se asigure că procesul rulează exact așa cum a fost planificat.