Naukowcy i technicy często muszą obliczyć stężenie komórek w zawiesinie. Na przykład, gdy pacjent pobiera krew w gabinecie lekarskim, laboratorium może użyć pewnych metod, aby wyszukać ilość białych krwinek w danej objętości krwi. To daje lekarzowi wiele informacji na temat stanu zdrowia pacjenta, zwłaszcza jego układu odpornościowego i tego, czy walczy z infekcją, czy inną chorobą. Takie testy mogą szukać wielu innych komórek we krwi, a także płynu mózgowo-rdzeniowego i innych płynów ustrojowych, takich jak liczba plemników w nasieniu w celu uzyskania płodności. Naukowcy obliczają również stężenia komórkowe bakterii, drożdży i innych mikroorganizmów do wielu celów, od badań ekologicznych po technologie przemysłowe. Jedna z najczęstszych technik jest również nauczana na wielu zajęciach z biologii w college'u i wykorzystuje urządzenie zwane komorą zliczającą.
Zanim zawiesina komórek trafi do komory zliczającej, może wymagać rozcieńczenia, ponieważ może zawierać tysiące lub miliony komórek. W takim przypadku komórki nie mogą być rozsądnie policzone. Aby rozcieńczyć próbkę, użyj sterylnej pipety do umieszczenia dziesięciu mikrolitrów roztworu komórkowego w probówce zawierającej 90 mikrolitrów rozcieńczalnika. Rodzaj rozcieńczalnika będzie zależał od rodzaju komórki. Dobrze wymieszaj. Ten roztwór jest teraz dziesięciokrotnie bardziej rozcieńczony niż próbka początkowa, więc jego współczynnik rozcieńczenia wynosi 10
-1. Oznacz to. Powtórz to kilka razy, za każdym razem używając sterylnej pipety, aż roztwór zostanie wystarczająco rozcieńczony. Jeśli rozcieńczyłeś go po raz drugi, druga probówka była 100 razy bardziej rozcieńczona niż roztwór początkowy, więc współczynnik rozcieńczenia wynosił 10-2 i tak dalej.Może być konieczne wykonanie kilku rozcieńczeń, aby określić właściwy współczynnik rozcieńczenia dla komory zliczającej. Komora zliczeniowa to w zasadzie bardzo małe, przezroczyste, prostokątne pudełko z precyzyjną głębokością i precyzyjną siatką wpisaną w górę. Jest również znany jako hemocytometr, a czasem hemacytometr. Celem jest, aby zawiesina była wystarczająco rozcieńczona, aby patrząc na nią w komorze zliczającej, komórki nie zachodziły na siebie i były rozprowadzane w siatce w jednolity sposób. Odpipetować rozcieńczoną zawiesinę zawierającą komórki do dołka w komorze zliczania, gdzie osadzi się w komorze siatkowej poprzez działanie kapilarne. Umieść komorę zliczeniową na stoliku mikroskopu i oglądaj ją z małą mocą.
Siatka zawiera kwadraty, które składają się z jeszcze mniejszych kwadratów. Wybierz około czterech lub pięciu kwadratów lub tyle, ile potrzebujesz, licząc co najmniej 100 komórek, w wybranym przez siebie wzorze, takim jak cztery rogi i kwadrat środkowy. Jeśli komórki są duże, mogą to być duże kwadraty, ale jeśli komórki są małe, możesz zamiast tego wybrać mniejsze kwadraty.
Konkretna objętość każdego kwadratu siatki może się różnić w zależności od producenta komory zliczającej, ale często głębokość komory wynosi 0,1 milimetrów, powierzchnia dużych kwadratów to 1 milimetr kwadratowy, a powierzchnia mniejszych kwadratów to 0,04 kwadrat milimetry. Większe kwadraty mają zatem objętość 0,1 milimetra sześciennego. W tym przykładzie załóżmy, że policzyłeś w sumie 103 komórki w pięciu kwadratach i że początkową próbkę rozcieńczono aż współczynnik rozcieńczenia wynosił 10-2.
Jeśli każdy kwadrat siatki ma objętość 0,1 milimetra sześciennego i policzono pięć, to całkowita objętość komory, która została zliczona, wynosiła 0,5 milimetra sześciennego, a komórki były 103. Podwojenie do 1 milimetra sześciennego dałoby 206 komórek. Jeden centymetr sześcienny odpowiada 1 mililitrowi, co jest użyteczną miarą dla cieczy. W centymetrze sześciennym jest 1000 milimetrów sześciennych. Dlatego też, gdyby istniał centymetr sześcienny lub mililitr zawiesiny, naliczono by 206 000 (206 x 1000) komórek. Tak to wygląda jako równanie:
Objętość kwadratu siatki × liczba zliczonych kwadratów = całkowita objętość zliczonej zawiesiny
Liczba komórek ÷ objętość zliczonej zawiesiny = liczba komórek na milimetr do sześcianu
Liczba komórek na milimetr do sześcianu × 1000 = liczba komórek na mililitr
Będziesz musiał uwzględnić wszelkie wykonane rozcieńczenia, aby początkowe rozwiązanie było policzalne pod mikroskopem. W tym przykładzie współczynnik rozcieńczenia wynosi 10-2. Aby obliczyć początkowe stężenie roztworu:
Liczba komórek na mililitr ÷ współczynnik rozcieńczenia = stężenie komórek
W tym przykładzie liczba komórek na mililitr wynosi 206000, a podzielenie tego przez 10-2 (0,01) daje stężenie komórek 20 600 000 komórek na mililitr w początkowej próbce.
