Bulion z pożywką w płynie służy do hodowli bakterii, takich jak Escherichia coli. Receptury na ten bulion różnią się w zależności od gatunku bakterii i obecności modyfikacji genetycznych, np. oporności na antybiotyki. Bulion można zestalić przez dodanie agaru, co umożliwia bakteriom tworzenie odrębnych kolonii, podczas gdy w płynnej kulturze po prostu dyspergują w całej objętości. Jest to podstawowa, ale niezbędna technika dla zaawansowanych metod, takich jak klonowanie genów czy testy mikrobiologiczne. W tym artykule założono, że standardowe laboratoryjne szczepy Escherichia coli mają być hodowane na płytkach agarowych (lub szalkach Petriego) bulionu Luria (LB).
Odważ 10 gramów tryptonu bakteryjnego, 5 gramów ekstraktu drożdżowego, 5 gramów chlorku sodu, 15 gramów agaru lub agarozy i 1 mililitr 1N wodorotlenku sodu. Wymieszać je z ilością sterylnej wody destylowanej i autoklawowanej do uzyskania 1 litra pożywki. Autoklawuj pożywki w luźno zamkniętych butelkach lub kolbach przez 25 minut. Pozostaw do ostygnięcia do około 50 stopni Celsjusza przed dodaniem odczynników, które ulegną zniszczeniu w wysokiej temperaturze, takich jak antybiotyki lub inne suplementy diety.
Pozostaw autoklawowane pożywki do ostygnięcia do 50 stopni Celsjusza i nie niższej niż 45 stopni Celsjusza, ponieważ agar zastygnie w pojemniku, zanim będzie można go wlać. Zaopatrzyć się w sterylne szalki Petriego i nalać tyle, aby pokryć całą powierzchnię płytki i co najmniej połowę jej głębokości. Unikaj przepełniania płytek i najlepiej nie pozwól, aby agar zetknął się z górną krawędzią szalki. Pozostawić płytki do zestalenia się w sterylnym środowisku (np. pod okapem z przepływem laminarnym), pozostawiając pokrywki zdjęte i do rogu kaptura.
Wysuszyć talerze. Chociaż płytki mogą być używane zaraz po ich zastygnięciu, na powierzchni agaru będzie znajdować się pewna ilość wilgoci, co zapobiegnie wystarczającemu przyleganiu kolonii bakteryjnych. Dlatego najlepiej wysuszyć płytki przed zaaplikowaniem jakichkolwiek bakterii, na przykład pozostawiając je do siedzenia na temperatura pokojowa przez kilka dni lub pół godziny pod okapem z nawiewem laminarnym lub w temperaturze 37 stopni Celsjusza inkubator.
Przechowuj talerze. Wysuszone talerze powinny być ułożone do góry nogami (odwrócone) na ich pokrywkach i zwrócone do oryginału opakowanie, zaklejone taśmą i owinięte folią chroniącą przed światłem lub w odpowiednim pojemnik. Zawsze zapisz datę przygotowania na płytkach i unikaj używania, jeśli płytki mają więcej niż 2 miesiące.
Bibliografia
- „Aktualne protokoły w biologii molekularnej”; Karen Elbing i Roger Brent; 2002
Wskazówki
- Wykonaj jak najwięcej z powyższych czynności (najlepiej wszystkie) w sterylnym środowisku (np. pod otwarty płomień lub kaptur z przepływem laminarnym), aby zapobiec przedostawaniu się i namnażaniu unoszących się w powietrzu zanieczyszczeń bakteryjnych głoska bezdźwięczna.
o autorze
Palmer Owyoung posiada tytuł magistra w dziedzinie biznesu międzynarodowego na Uniwersytecie Kalifornijskim w San Diego oraz and Bachelor of Arts z socjologii na Uniwersytecie Kalifornijskim w Santa Barbara i jest wyszkolonym molekularnym biolog. Od 2006 roku jest niezależnym pisarzem. Oprócz pisania jest pełnoetatowym traderem Forex i marketerem internetowym.
Kredyty fotograficzne
Jupiterimages/Comstock/Getty Images