Jednym z klasycznych sposobów określania stężenia drobnoustrojów w próbce jest rozcieńczenie próbki, hodowanie drobnoustrojów na płytkach i policzenie kolonii. Mikroby na płytkach rosną z jednostki tworzącej kolonię składającej się z jednej lub więcej komórek w widoczną kolonię, którą można zobaczyć i policzyć. Bakterie są najczęstszymi drobnoustrojami ocenianymi za pomocą liczby płytek. Zliczanie kolonii służy do wykrywania i liczenia drobnoustrojów w glebie, wodzie i żywności. Protokoły liczenia kolonii podkreślają dokładne i metodyczne podejście.
Rozcieńczanie próbek, posiew i inkubacja
Jeśli po prostu rozsmarujesz próbkę drobnoustroju na płytce agarowej, zobaczysz tak wiele jednostek tworzących kolonie, że poszczególne kolonie połączą się ze sobą, uniemożliwiając ich zliczenie. Aby rozwiązać ten problem, wymieszaj próbkę z płynnym medium, weź niewielką ilość tej mieszaniny i dalej ją rozcieńcz. Powtórz ten proces od sześciu do 10 razy. Rozprowadzić końcowe rozcieńczenie na płytce agarowej i inkubować przez cztery do siedmiu dni przed policzeniem kolonii.
Liczenie ręczne
Podstawową sztuczką w liczeniu kolonii jest liczenie każdej kropki kolonii raz. Jednym z podejść jest ustawienie szalki Petriego na siatkowym tle i policzenie kolonii w każdej komórce siatki, przesuwając się metodycznie przez wszystkie komórki. Pomocnym podejściem może być również oznaczenie zliczonych kolonii z tyłu szalki Petriego. Ogólnie rzecz biorąc, musisz policzyć co najmniej trzy talerze; Używaj tylko płytek zawierających od 30 do 300 kolonii, aby uzyskać solidne wnioski, sugeruje Microbiology Network, firma świadcząca usługi konsultingowe dla laboratoriów i producentów. Płytki z koloniami, które są zbyt liczne, aby je policzyć lub ze zbyt małą liczbą kolonii, należy ponownie wysiać z nowego rozcieńczenia.
Liczenie automatyczne
Błąd ludzki wydłuża czas ręcznego liczenia kolonii. Aby poprawić zarówno dokładność, jak i wydajność, umieść szalkę Petriego w automatycznym urządzeniu do liczenia kolonii. Zautomatyzowane liczniki kolonii wykonują obraz szalki, oddzielają kolonie od tła, a następnie używają algorytmu do zliczania kolonii na płytce. Algorytmy mogą mieć trudności z różnicowaniem kolonii, gdy dwie lub więcej kolonii styka się na krawędziach, więc jest to obszar ciągłego rozwoju oprogramowania.
Bardziej skomplikowane liczenie
Dokładność obliczania gęstości drobnoustrojów na podstawie liczby kolonii ma pewne ograniczenia. Jednostki tworzące kolonie mogą być pojedynczą komórką, łańcuchem komórek lub całym skupiskiem komórek. Założenie jest takie, że kolonia reprezentuje jedną komórkę, więc stężenia obliczone na podstawie liczby kolonii mogą być niskie. Różne drobnoustroje potrzebują różnych warunków wzrostu, a kolonie na płytce reprezentują tylko te drobnoustroje, które rozwijają się na tej pożywce wzrostowej w tych warunkach inkubacji. Ponadto liczenie kolonii nie rejestruje martwych komórek, co jest ważnym czynnikiem, gdy potrzebne jest stężenie komórek w oryginalnej próbce.
