HPLC oferuje szybką, zautomatyzowaną i bardzo dokładną metodę identyfikacji niektórych składników chemicznych w próbce, ale może być kosztowna, złożona i nie działa dla wszystkich próbek. Laboratoria medyczne, kryminalistyczne, środowiskowe i produkcyjne wykorzystują tę technikę do ilościowego oznaczania i oddzielania substancji chemicznych w próbce. HPLC ma zarówno zalety, jak i wady w porównaniu z innymi technikami.
HPLC i podobne techniki
Podobnie jak inne formy chromatografii, HPLC umożliwia rozdział składników chemicznych poprzez zastosowanie fazy ruchomej i fazy stacjonarnej. Faza ruchoma jest ciekła, a faza stacjonarna jest stała. Ponieważ różne komponenty poruszają się z różnymi prędkościami, oddzielają się od siebie. Alternatywne techniki obejmują elektroforezę kapilarną, w której substancje migrują przez roztwory w polowe i inne metody chromatograficzne, takie jak ekstrakcja do fazy stałej, chromatografia gazowa i cienkowarstwowa chromatografia.
Szybkość, wydajność i dokładność
W porównaniu z innymi technikami chromatograficznymi, takimi jak TLC, HPLC jest niezwykle szybka i wydajna. Wykorzystuje pompę zamiast grawitacji, aby przetłaczać ciekły rozpuszczalnik przez stały materiał adsorbujący, z różnymi składnikami chemicznymi oddzielającymi się, gdy poruszają się z różnymi prędkościami. Proces można zakończyć w około 10 do 30 minut i zapewnia wysoką rozdzielczość. Jest dokładny i wysoce powtarzalny. Ponieważ jest w dużej mierze zautomatyzowany, podstawowe przebiegi HPLC można wykonać przy minimalnym szkoleniu.
Koszt i złożoność
Pomimo swoich zalet, HPLC może być kosztowna, wymagając dużych ilości drogich substancji organicznych. Techniki, takie jak ekstrakcja do fazy stałej i elektroforeza kapilarna, mogą być tańsze i nawet szybsze, szczególnie w przypadku analizy zgodnie z dobrą praktyką produkcyjną. Chociaż stosowanie istniejących metod HPLC jest stosunkowo łatwe, rozwiązywanie problemów lub opracowywanie nowych metod może być skomplikowane. Wynika to w dużej mierze z szeregu różnych modułów, kolumn i faz ruchomych.
Czułość i rozdzielczość
Ogólnie rzecz biorąc, HPLC jest wszechstronna i niezwykle precyzyjna, jeśli chodzi o identyfikację i kwantyfikację składników chemicznych. Przy wielu zaangażowanych etapach precyzja HPLC zależy w dużej mierze od zautomatyzowania procesu, a zatem wysoce powtarzalnego. HPLC ma niską czułość dla niektórych związków, a niektórych nie można wykryć, ponieważ są nieodwracalnie adsorbowane. Substancje lotne są lepiej oddzielane za pomocą chromatografii gazowej.