Resultaten van flowcytometrie begrijpen?

Verduidelijk het doel van het experiment door te vragen: "Wat was de vraag of hypothese die werd onderzocht?" Dit zal zijn vereist om de onbewerkte resultaten aan te passen aan het juiste formaat en de juiste instellingen voor verdere analyse met behulp van statistische cytometrie software. Breng alle wijzigingen aan die nodig zijn om de gegevens weer te geven met de relevante instellingen (bijv. positieve cellen, negatieve poorten, fluorescentie-intensiteit, celpopulaties enz.).

Vind poorten. Cellen kunnen worden gegroepeerd of eenvoudig geclusterd worden waargenomen op een dichtheidsplot of contourdiagram. De groepen gaan vaak uit elkaar, afhankelijk van hun identiteit. Als een groep heel intens kleurt voor een bepaalde marker of antilichaam, wordt geconcludeerd dat de leden van die groep allemaal de identiteit hebben van het specifieke celtype dat die marker tot expressie brengt. Het is gebruikelijk om cellen te vinden die positief zijn voor meer dan één van deze markers, en deze cellen zijn meestal een tussenproduct en worden aangeduid als 'dubbel positief'.

Kijk naar spreidingsgrafieken. De manier waarop de groepen cellen zich in een spreidingsplot verspreiden, is een indicatie van de grootte van de cellen. Cellen met zeer grote of hoge verstrooiing zijn typisch grote cellen; ze kunnen echter groot zijn omdat ze een hoog gehalte aan cytoplasma bevatten, of ze kunnen hoog zijn omdat ze een zeer grote kern hebben. Afhankelijk van de biologie die wordt onderzocht, zal dit natuurlijk sterk variëren tussen experimenten.

Kijk naar cijfers. Pas de plots aan om verschillende parameters op één as weer te geven (meestal de X-as) terwijl de tellingen op de Y-as worden gehouden. Dit geeft het deel van de steekproefpopulatie aan dat positief is voor die bepaalde parameter, als a piek wordt normaal gesproken waargenomen in een positief gekleurd monster, dat afwezig zal zijn in de negatieve controle monster.

Kijk naar histogrammen met meerdere parameters. Door de X-as en de Y-as aan te passen om elk een andere parameter te vertegenwoordigen die was onderzocht tijdens het experiment, is het mogelijk om een ​​dieper inzicht te krijgen in de eigenschappen van het monster. Door bijvoorbeeld de X-as in te stellen op rode fluorescentie en de Y-as op groene fluorescentie, kunnen kwadrantachtige poorten worden berekend voor de monster om vier regio's van een kwadrant te tonen waarin cellen aanwezig zijn en gekleurd zijn voor rode of groene fluorescentie, beide kleuren, of geen bij alle. Hierdoor kan een heterogeen monster worden verdeeld in zijn samenstellende delen en kunnen overlappende entiteiten worden gevisualiseerd en gekwantificeerd.

Referenties

Over de auteur

Fotocredits