De belangrijkste reden waarom u een monster kleurt voordat u het onder de microscoop legt, is om het beter te kunnen bekijken, maar kleuring doet veel meer dan alleen de contouren van cellen markeren. Sommige vlekken kunnen celwanden binnendringen en celcomponenten markeren, en dit kan wetenschappers helpen metabolische processen te visualiseren. Vlekken helpen ook onderscheid te maken tussen levende cellen en dode cellen. Bovendien kunnen wetenschappers met kleuring het aantal cellen van een bepaald type binnen een bepaalde biomassa tellen. Er bestaan twintig of meer verschillende soorten vlekken, en elk heeft zijn doel.
TL; DR (te lang; niet gelezen)
Het belangrijkste doel van kleuring is om cellen en delen van cellen te markeren. Er zijn meer dan 20 verschillende soorten vlekken en het type vlek dat u gebruikt, hangt af van wat u zoekt.
Soorten vlekken
De keuze van de beits hangt af van wat u zoekt. Niet alle vlekken zijn geschikt voor levende cellen, maar die zijn onder meer Bismarck-bruin, tolueenrood, Nijlblauw en Nijlrood, en bepaalde fluorescerende stoffen die worden gebruikt om DNA te markeren. Sommige vlekken markeren sporen, sommige detecteren lipiden en eiwitten en sommige veranderen van kleur in aanwezigheid van zetmeel. Het doel van het onderzoek bepaalt welk type beits het beste kan worden gebruikt. Een arts die een PAP-uitstrijkje maakt, zou bijvoorbeeld Eosine Y gebruiken. Het is een zure fluorescerende kleurstof die rood wordt wanneer deze in contact komt met rode bloedcellen, cytoplasma en celmembranen. Het wordt ook gebruikt om bloedmerg te testen.
In sommige gevallen kan een onderzoeker meer dan één vlek gebruiken. Hematoxyline is bijvoorbeeld een vlek die celkernen blauw kleurt. Bij gebruik in combinatie met eosine, dat de andere delen van de cel rood of roze kleurt, zorgt het voor een sterker contrast en maakt het de kernen gemakkelijker te onderscheiden. PAP-uitstrijkjes en bloedmergmonsters zijn gemakkelijker te onderzoeken wanneer deze twee vlekken samen worden gebruikt.
Gram's vlek: Ziekenhuismedewerkers gebruiken Gram's vlek om schadelijke bacteriën te identificeren. Dit is eigenlijk een reeks kleurstoffen die verschillende effecten hebben op verschillende soorten bacteriën en artsen een belangrijk diagnostisch hulpmiddel geven. Gram's vlek is een drieledig proces. In de eerste wordt Hucker's kristalviolet toegevoegd, dat alle bacteriën een uniforme violette kleur geeft. In de volgende fase wordt jodiumkleuring toegevoegd, waardoor de kleur hecht aan Gram-positieve cellen, voornamelijk Staphylococcus en Streptococcus. De vlek wordt weggewassen, waardoor de Gram-positieve cellen een duidelijke violette kleur hebben; vervolgens wordt een derde kleuring, Safranine O, geïntroduceerd om het contrast tussen de Gram-negatieve bacteriën en de rest van het materiaal in het objectglaasje te verbeteren.
Kleuringsprocedure:
Wanneer u een preparaat op een objectglaasje voorbereidt, kunt u het droog of nat monteren, in dunne plakjes snijden of uitsmeren. Bij het gebruik van een vlek is de gebruikelijke procedure om het monster nat te maken, wat betekent dat een druppel water op het objectglaasje wordt geplaatst, het monster in het water wordt geplaatst en wordt afgedekt met een dekglaasje. Vervolgens brengt u de vlek aan op een hoek van het objectglaasje met een druppelaar en laat u deze door capillaire werking naar het monster worden getrokken. Het helpt om een papieren handdoek aan de andere kant van de glijbaan te leggen om het water aan te trekken. Zodra de vlek zich over het hele objectglaasje heeft verspreid, is het monster klaar voor onderzoek.