Lai atdalītu savienojumu maisījumus, ķīmiķi izmanto augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfiju vai HPLC. Parasti metode sastāv no parauga ievadīšanas kolonnā, kur tas sajaucas ar vienu vai vairākiem šķīdinātājiem. Dažādi savienojumi dažādās pakāpēs adsorbē vai “pielīp” kolonnā; un, kad šķīdinātājs izspiež savienojumus caur kolonnu, viens no maisījuma komponentiem vispirms izies no kolonnas. Instruments nosaka savienojumus, izejot no kolonnas, un izveido hromatogrammu, kas sastāv no diagrammas ar aiztures laiku uz x ass un signāla intensitāti no detektora uz y ass. Kad savienojumi iziet no kolonnas, tie hromatogrammā rada “smailes”. Kopumā, jo tālāk viens no otra un šaurāki pīķi hromatogrammā, jo augstāka izšķirtspēja. Zinātnieki uzskata, ka izšķirtspēja 1,0 vai lielāka ir pietiekama nošķiršana.
Izmēra divu blakus esošo pīķu platumus hromatogrammā, atzīmējot, kur x ass vērtības atrodas katras smailes pamatnē. X ass apzīmē aiztures laiku, ko mēra sekundēs. Tādējādi, ja pīķis sākas 15,1 sekundē un beidzas 18,5 sekundē, tā platums ir (18,5 - 15,1) = 3,4 sekundes.
Nosakiet aiztures laikus, atzīmējot laiku, t.i., vietu uz x ass, kas atbilst pīķu maksimumu atrašanās vietām. Šī vērtība parasti ir aptuveni pusceļā starp divām vērtībām, kas izmantotas, lai aprēķinātu platumu 1. solī. Piemēram, 1. solī sniegtā piemēra maksimums ir aptuveni 16,8 sekundes.
Aprēķiniet izšķirtspēju R starp divām smailēm:
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0,5 (W_1 + W_2)}
kur RT1 un RT2 attēlo 1. un 2. pīķa un W aiztures laikus1 un W2 attēlo to pamatu platuma pīķi. Turpinot piemēru no 2. un 3. darbības, viena pīķa aiztures laiks ir 16,8 sekundes un platums 3,4 sekundes. Ja otrā pīķa aiztures laiks bija 21,4 sekundes un platums 3,6 sekundes, tad izšķirtspēja būtu:
R = \ frac {21,4-16,8} {0,5 (3,4 + 3,6)} = 1,3
Jums nepieciešamās lietas
- HPLC hromatogramma
- Kalkulators