Zinātniekiem un tehniķiem bieži jāaprēķina šūnu koncentrācija suspensijā. Piemēram, kad pacientam tiek ņemtas asinis ārsta kabinetā, laboratorija var izmantot noteiktas metodes, lai meklētu balto asins šūnu daudzumu noteiktā asins tilpumā. Tas dod ārstam daudz informācijas par viņas pacienta veselību, it īpaši viņa imūnsistēmu un to, vai viņš cīnās ar infekciju vai citu slimību. Šādi testi var meklēt daudzas citas šūnas asinīs, kā arī mugurkaula šķidrumu un citus ķermeņa šķidrumus, piemēram, spermas šūnu skaitu spermā auglības nolūkos. Zinātnieki arī aprēķina baktēriju, rauga un citu mikroorganismu šūnu koncentrāciju dažādiem mērķiem, sākot no ekoloģiskiem pētījumiem līdz rūpnieciskām tehnoloģijām. Viena no izplatītākajām metodēm tiek mācīta arī daudzās koledžas bioloģijas stundās, un tajā tiek izmantota ierīce, ko sauc par skaitīšanas kameru.
Pirms šūnu suspensijas var nonākt skaitīšanas kamerā, tā var būt jāatšķaida, jo tajā varētu būt tūkstošiem vai miljonu šūnu. Tādā gadījumā šūnas nevar pamatoti saskaitīt. Lai atšķaidītu paraugu, ar sterilu pipeti ievieto desmit šūnas šķīduma mikrolitrus mēģenē, kurā ir 90 mikrolitri atšķaidītāja. Atšķaidītāja veids būs atkarīgs no šūnas veida. Labi samaisa. Šis šķīdums tagad ir desmit reizes vairāk atšķaidīts nekā sākotnējais paraugs, tāpēc tā atšķaidīšanas koeficients ir 10
-1. Iezīmējiet to. Atkārtojiet to vairākas reizes, katru reizi izmantojot sterilu pipeti, līdz šķīdums ir pietiekami atšķaidīts. Ja jūs to atšķaidījāt otro reizi, otrā mēģene bija 100 reizes vairāk atšķaidīta nekā sākotnējais šķīdums, tāpēc atšķaidīšanas koeficients bija 10-2 un tā tālāk.Jums var būt nepieciešams izmēģināt vairākus atšķaidījumus, lai noteiktu pareizo skaitīšanas kameras atšķaidīšanas koeficientu. Skaitīšanas kamera būtībā ir ļoti maza, dzidra, taisnstūrveida kaste ar precīzu dziļumu un precīzu režģi, kas ierakstīts pa augšu. To sauc arī par hemocitometru vai dažreiz par hemacitometru. Mērķis ir panākt, lai suspensija būtu pietiekami atšķaidīta, lai, to aplūkojot skaitīšanas kamerā, neviena šūna nepārklātu un tās vienmērīgi sadalītos pa režģi. Atšķaidīto šūnu saturošo suspensiju pipetē iedobē skaitīšanas kamerā, kur ar kapilāru iedarbību tā nosēžas režģa kamerā. Novietojiet skaitīšanas kameru uz mikroskopa pakāpes un skatiet to ar mazu jaudu.
Režģī ir kvadrāti, kas veidoti no vēl mazākiem kvadrātiem. Atlasiet apmēram četrus vai piecus kvadrātus vai tik daudz, cik jums ir nepieciešams saskaitīt vismaz 100 šūnas pēc jūsu izvēlētā parauga, piemēram, četrus stūrus un centra kvadrātu. Ja šūnas ir lielas, tie varētu būt lielie kvadrāti, bet, ja šūnas ir mazas, tā vietā varat izvēlēties mazākus kvadrātus.
Katra režģa kvadrāta īpatnējais tilpums var atšķirties atkarībā no skaitīšanas kameras ražotāja, taču bieži vien kameras dziļums ir 0,1 milimetros, lielo kvadrātu laukums ir 1 kvadrātmilimetrs, un mazāko kvadrātu laukums ir 0,04 kvadrātmetri milimetri. Tad lielāko kvadrātu tilpums ir 0,1 kubikmilimetri. Pieņemsim, ka šajā piemērā piecos kvadrātos esat saskaitījis kopumā 103 šūnas un ka sākotnējo paraugu atšķaidījāt, līdz atšķaidīšanas koeficients bija 10-2.
Ja katra režģa kvadrāta tilpums ir 0,1 kubikmilimetri un tika saskaitīti pieci, tad saskaitītās kameras kopējais tilpums bija 0,5 kubikmilimetri, un tajā bija 103 šūnas. Divkāršojot, lai tas būtu 1 kubiskais milimetrs, tas kļūtu par 206 šūnām. Viens kubikcentimetrs ir ekvivalents 1 mililitram, kas ir noderīgs šķidrumu mērījums. Kubikcentimetrā ir 1000 kubikmilimetri. Tāpēc, ja suspensija būtu bijusi kubikcentimetrs vai mililitrs, jūs būtu saskaitījis 206 000 (206 x 1000) šūnas. Tas izskatās kā vienādojums:
Režģa kvadrāta tilpums × saskaitīto kvadrātu skaits = saskaitītās suspensijas kopējais tilpums
Šūnu skaits ÷ saskaitītās suspensijas tilpums = šūnu skaits kubikmetros
Šūnu skaits milimetros kubā × 1000 = šūnu skaits mililitrā
Jums būs jāņem vērā visi veiktie atšķaidījumi, lai sākotnējais šķīdums būtu saskaitāms zem mikroskopa. Šajā piemērā atšķaidīšanas koeficients ir 10-2. Lai aprēķinātu sākotnējo šķīduma koncentrāciju:
Šūnu skaits mililitrā ÷ atšķaidīšanas koeficients = šūnu koncentrācija
Šajā piemērā šūnu skaits uz mililitru ir 206 000, dalot to ar 10-2 (0,01) dod šūnu koncentrācijai 20 600 000 šūnu mililitrā sākotnējā paraugā.