DNS
Dezoksiribonukleīnskābe un olbaltumvielas. DNS ir sakārtots vienībās, ko sauc par gēniem, no kuriem katrs kodē noteiktu RNS vai olbaltumvielu secību. Gēni tiek pētīti, lai uzzinātu par bioloģisko struktūru un funkciju, evolūciju, slimībām un daudziem citiem dzīves sistēmu aspektiem. Lai detalizēti izpētītu gēnus, DNS jāizolē un jāattīra no interesējošajām šūnām.
DNS ieguve
Lai arī DNS var iegūt un izpētīt no vienas šūnas, to nepietiek, lai redzētu ar neapbruņotu aci. Lai iegūtu pietiekamu daudzumu spolēšanai, jo vairāk šūnu jums jāstrādā, jo labāk (daudzi miljoni).
Precīzi protokoli ievērojami atšķiras, lai ņemtu vērā konkrētu paraugu unikālās īpašības, taču vispārējie posmi ir homogenizācija, lizēšana, sagremošana, atdalīšana un savākšana. Procedūru vislabāk var veikt nelielā (atkarībā no parauga lieluma) stikla vai plastmasas mēģenē.
Paraugs parasti tiek sajaukts vai sasmalcināts, lai šūnas rūpīgi atdalītu viena no otras. Tas padara šūnu sastāvdaļas pieejamākas sekojošajiem reaģentiem. Pēc tam homogenātam pievieno mazgāšanas līdzekli vai fermentus, lai lizētu šūnu membrānas (un kodola membrānas, ja šūnas ir eikariotas), lai atbrīvotu DNS. Šajā brīdī DNS ieskauj olbaltumvielas, lipīdi, ogļhidrāti un viss pārējais, kas bija šūnās.
Olbaltumvielu šķelšanai var būt nepieciešama papildu fermentatīvā šķelšana, lai tie nesaistītos ar DNS un netraucētu tās savākšanu. DNS atdala no pārējā šūnu satura, pievienojot aukstu, tīru, etilspirtu vai izopropilspirtu. DNS šajos spirtos nešķīst, tāpēc tas kondensēsies, lai mēģinātu pēc iespējas samazināt tā saskari ar spirtu. Pēc tam kondensētā DNS tika savākta, parasti centrifugējot vai spolējot.
DNS spolēšana
DNS savākšana ar spolēšanu ir efektīva, ja ekstrahēšanas procesā iegūst lielu daudzumu DNS. Tā ir arī lieliska demonstrācijas metode, jo skaidri redzams iespaidīgs tīras DNS mudžeklis.
Lai spolētu DNS, atdalīšanas solis jāveic uzmanīgi. Ja tā nebija iepriekš pievienotā lizēšanas reaģenta maisījuma daļa, pirms spirta pievienošanas šķīdumam jāpievieno koncentrēts sāls šķīdums (nātrija hlorīds). Auksto spirtu lēnām lej testa mēģenes malā, veidojot slāni virs ūdens šķīduma, izvairoties no sajaukšanās. Ja tas tiek izdarīts pareizi, tad alkohols sāļajam slānim izveidos savu slāni. Tad nāk spole.
Lai savāktu DNS no sāļā slāņa, uzmanīgi ielieciet stikla maisīšanas stieni spirta slānī, līdz tas pieskaras mēģenes apakšai. Lēnām grieziet stieni starp pirkstiem, vienlaikus vērojot saskarni starp abiem slāņiem. Ja ir pietiekami daudz DNS, tas sakrājas saskarnē starp slāņiem, veidojot pienaini caurspīdīgu masu. Pagrieziet stieni, lai aptītu DNS ap to (tas ir spoles daļa), un izvelciet to no caurules. DNS uzglabāšanai vai turpmākai analīzei var pārnest uz citu tīra spirta mēģeni.
