Kad esat izlaidis DNS paraugus uz agarozes želejas un uzņēmis attēlu, jūs varat to saglabāt vēlākam laikam, kurā jūs varat analizēt rezultātus un tos interpretēt. Veidi, ko meklējat, būs atkarīgi no jūsu eksperimenta veida. Piemēram, ja veicat DNS pirkstu nospiedumu noņemšanu, iespējams, vēlēsities salīdzināt DNS paraugu lielumu no diviem paraugiem - varbūt no aizdomās turētā un no nozieguma vietas parauga. Savukārt, ja jūs strādājat ar baktēriju plazmīdām, jums, iespējams, būs jāpārliecinās, vai plazmīdā ir ievietots ieliktnis. Līdz ar to tas, kā jūs interpretējat savu želeju, daļēji būs atkarīgs no jūsu veiktā eksperimenta. Tomēr jūs varat piemērot dažus vispārīgus noteikumus.
Ņemiet vērā, ka jums var būt vai nav jāizmanto šajā sadaļā sniegtie norādījumi. Elektroforēzi ar agarozes gēlu bieži izmanto, lai apstiprinātu, ka plazmīds satur doto ieliktni. Ja nestrādājat ar plazmīdām, varat izlaist šo sadaļu. Ja tomēr esat, varat izpildīt šos norādījumus.
Ievērojiet, ka, ja strādājat ar nesagrieztām vai niķotām plazmīdām, izmēru nevar novērtēt, izmantojot iepriekš 1. sadaļā aprakstīto procedūru. Tas ir tāpēc, ka nesagrieztas un iesauktas plazmīdas migrē dažādos ātrumos no lineārās DNS.
Salīdziniet joslu skaitu katrā joslā. Atgādināsim, ka restrikcijas ferments sagriež DNS vietās, kur notiek noteikta secība, ko sauc par restrikcijas vietu. Ja paraugs tika apstrādāts ar DIVI restrikcijas enzīmiem, abiem jābūt klāt ieliktņa joslai un atlikušajai plazmīda daļai. Tas ir tāpēc, ka ieliktni papildinās divas restrikcijas vietas, katra atšķirīgam fermentam, tāpēc iegriezumi abās šajās vietās atbrīvos insertu no plazmīdas. Griezums tikai vienā vietā, savukārt, pārveidos plazmīdu par lineāru DNS. Paraugam, kas sagriezts bez restrikcijas enzīmiem, vai vienam restrikcijas enzīmam, tad jābūt ar vienu joslu, bet paraugam, kas sagriezts ar diviem restrikcijas fermentiem, jābūt divām joslām.
Pievērsiet uzmanību joslām, kuras izveidojusi iesaukta plazmīda DNS. Nikaitai plazmīdai ir griezums tikai vienā virknē, tāpēc tā migrē lēnāk nekā griezta plazmīda. Grieztas plazmīdas savukārt migrē lēnāk nekā nesagriezta DNS.
Novērtējiet ieliktņa izmēru, izmantojot 1. sadaļā aprakstīto procedūru, un nosakiet, vai tas atbilst jūsu cerībām (kas mainīsies atkarībā no eksperimenta).
Jums nepieciešamās lietas
- Zīmulis
- Papīrs
- Izklājlapu programma
- Jūsu želejas attēls
- Lineāls