Šķidru uzturvielu buljonu izmanto tādu baktēriju kā Escherichia coli kultivēšanai. Šī buljona receptes atšķiras atkarībā no baktēriju sugas un ģenētisko modifikāciju klātbūtnes, piemēram, rezistences pret antibiotikām. Buljonu var sacietēt, pievienojot agaru, kas ļauj baktērijām veidot atšķirīgas kolonijas, savukārt šķidrā kultūrā tās vienkārši izkliedējas visā tilpumā. Šī ir pamata, bet būtiska tehnika progresīvām metodēm, piemēram, gēnu klonēšanai vai mikrobioloģiskiem testiem. Šajā rakstā tiek pieņemts, ka standarta laboratorijas Escherichia coli celmi jāaudzē uz Luria buljona (LB) agara plāksnēm (vai Petri trauciņiem).
Nosver 10 gramus baktēriju līmeņa triptona, 5 gramus rauga ekstrakta, 5 gramus nātrija hlorīda, 15 gramus agara vai agarozes un 1 mililitru 1 N nātrija hidroksīda. Sajauc tos ar tilpumu destilēta un autoklāvēta sterila ūdens, līdz iegūst 1 litru barotnes. Autoklāvējiet barotnes brīvi aizkorķētās pudelēs vai kolbās 25 minūtes. Pirms pievienojat reaģentus, kas tiks iznīcināti lielā karstumā, piemēram, antibiotikas vai citus uztura bagātinātājus, ļaujiet tam atdzist līdz aptuveni 50 grādiem pēc Celsija.
Ļaujiet autoklāvā esošajam barotnei atdzist līdz 50 grādiem pēc Celsija un ne zemākam par 45 grādiem pēc Celsija, jo agars pirms tā ielešanas iestājas savā traukā. Iegūstiet sterilus Petri trauciņus un ielejiet tik daudz, lai pārklātu visu plāksnes virsmas laukumu un vismaz pusi no tā dziļuma. Izvairieties no plākšņu pārpildīšanas un vēlams, lai agars nesaskartos ar trauka augšējo malu. Ļaujiet plāksnēm sacietēt sterilā vidē (piemēram, zem lamināras plūsmas pārsega), atstājot vākus un uz pārsega stūra.
Nosusiniet plāksnes. Lai gan plāksnes var izmantot, tiklīdz tās ir nostiprinātas, uz agara virsmas būs nedaudz mitruma, kas novērsīs baktēriju koloniju pietiekamu pielipšanu. Tāpēc vislabāk ir nožūt plāksnes pirms baktēriju uzklāšanas, piemēram, atstājot tās sēdēt istabas temperatūrā dažas dienas vai pusstundu zem slāņveida plūsmas pārsega vai 37 grādos pēc Celsija inkubators.
Glabājiet plāksnes. Žāvētas plāksnes jāuzliek otrādi (otrādi) uz vākiem un jāatgriež pie sākotnējās iesaiņoti iesaiņoti un vai nu iesaiņoti folijā, lai pasargātu no gaismas, vai piemērotā iepakojumā konteiners. Vienmēr uz plāksnēm uzrakstiet sagatavošanas datumu un izvairieties no tā, ja plāksnes ir vecākas par 2 mēnešiem.
Atsauces
- "Pašreizējie protokoli molekulārajā bioloģijā"; Karena Elbinga un Rodžers Brents; 2002
Padomi
- Veiciet pēc iespējas vairāk no iepriekš minētajām darbībām (vēlams visas) sterilā vidē (piemēram, zem atklāta liesma vai lamināra plūsmas pārsegs), lai novērstu baktēriju piesārņotāju iekļūšanu gaisā un to augšanu plašsaziņas līdzekļi.
par autoru
Palmer Owyoung ir ieguvis mākslas maģistra grādu starptautiskajā biznesā Kalifornijas universitātē Sandjego un a Mākslas bakalaurs socioloģijā Kalifornijas Universitātē Santa Barbarā un ir apmācīts molekulārs biologs. Kopš 2006. gada viņš ir ārštata rakstnieks. Papildus rakstīšanai viņš ir pilna laika Forex tirgotājs un interneta tirgotājs.
Foto kredīti
Jupiterimages / Comstock / Getty Images