Jūsu skolotājs pasniedz jums baktēriju paraugu un jautā: Cik dzīvotspējīgu mikroorganismu ir šajā paraugā? Ko tas nozīmē un kā jūs to izdomājat? Viena metode ir atrast to skaitu koloniju veidojošās vienības(CFU).
Kas ir CFU?
CFU attiecas uz jebkuru mikroorganismu atsevišķu koloniju skaitu, kas aug uz barotnes plāksnes. Šī vērtība savukārt norāda to baktēriju skaitu, kuras spēj replikēties, jo uz plāksnes ir izveidojušas kolonijas. Ir CFU formula, kas ietver paraugu ņemšanu.
Kā atrast CFU?
Baktēriju skaitīšana šķidrā paraugā ir ļoti sarežģīta. Viņu ir pārāk daudz, un tie ir pārāk mazi. Turklāt daži no viņiem var būt miruši un citi dzīvi, un mirušajiem nevajadzētu ieskaitīt kopējo summu. Jūs interesē tikai dzīvotspējīgs baktērijas vai baktērijas, kas var atkārtoties. Tātad, kā jūs varat saprast, cik daudz baktēriju jums ir?
Tādā pašā veidā, kā jūs varat veikt 1000 cilvēku aptauju un piemērot to 10 000 cilvēkiem, lai saprastu, kā viņi varētu domāt par noteiktu tēmu. Jūs varat mēģināt paņemt nelielu daļu no sākotnējā parauga, noskaidrot, cik baktēriju ir šo daļu, un pēc tam aprēķiniet, lai aptuveni noteiktu, cik oriģinālā to varēja būt paraugs.
Atšķaidījumu izmantošana CFU atrašanai
Procedūra noteiktā parauga CFU atrašanai ietver šī parauga vispirms atšķaidīšanu. Pēc tam atšķaidījumus pārklāj uz plāksnēm ar pareizu augšanas barotni. Vairāki atšķaidījumi bieži ir laba ideja, jo sākotnējais paraugs var būt ļoti koncentrēts.
Pēc tam, kad baktērijas ir ļāvušas uz plāksnēm augt noteiktu laiku, atsevišķas kolonijas tiek saskaitīti uz šķīvja. Ja paraugs bija pārāk koncentrēts, tad atsevišķu koloniju vietā jūs redzēsiet lielu platību, kas pārklāta ar baktēriju augšanu, ko sauc par a zālienu. Tas nozīmē, ka jums vajadzētu vēl vairāk atšķaidīt savu paraugu un mēģināt atkal augt, lai jūs varētu redzēt atsevišķas kolonijas.
Tā kā atsevišķas kolonijas nāk no vienas baktērijas, kas daudzkārt atkārtojas, tikai šīs tiek ieskaitītas CFU.
Eksperimentālā procedūra CFU atrašanai
CFU aprēķina atšķaidījumu izmantošanas piemērs varētu būt šāds: Pirmkārt, no sākotnējā parauga, ko jums dod skolotājs, jūs paņemat 1 ml un uzlieciet to plāksnē. Nākamajā dienā jūs redzat, ka ir baktēriju zāliens. Tas nozīmē, ka jūs nevarat saskaitīt CFU skaitu. Nākamais solis ir dažu atšķaidījumu veikšana.
Pirmkārt, jūs ņemat 1 ml parauga un atšķaida to 9 ml šķidrā vidē. Tā kā atšķaidījums ir viena parauga daļa līdz deviņām daļām atšķaidītāja, to sauc par atšķaidījumu 1:10. Pēc tam ņem 1 ml atšķaidījuma 1:10 un pievieno to 9 ml šķidruma. Šis atšķaidījums ir 1: 100 atšķaidījums. Visbeidzot, jūs veicat atšķaidījumu 1: 1 000, ņemot 1 ml atšķaidījuma 1: 100 un pievienojot 9 ml šķidras vides. Katram atšķaidījumam jums tagad ir 10 ml atšķaidītas baktēriju kultūras.
Pabeigti atšķaidījumi, jūs uz plāksnēm ievietojat 0,5 ml atšķaidījumu. Noteikti iezīmējiet plāksnes, ar kurām tika uzklāts atšķaidījums.
Nākamajā dienā jūs atgriežaties un redzat, ka uz visām plāksnēm ir atsevišķas kolonijas. Jūs vēlaties izvēlēties šķīvi starp 30 un 300 kolonijas. Jūs redzat, ka atšķaidīšanas plāksnē 1: 1 000 ir apmēram 10 kolonijas, tas nozīmē, ka esat pārāk atšķaidījis paraugu. Šī plāksne nebūs noderīga CFU atrašanā.
Atšķaidīšanas plāksnē 1:10 ir daudz koloniju, varbūt vairāk nekā 300. Tādā gadījumā jūs varat pāriet uz 1: 100 plāksnes. Jūs saskaitāt kolonijas uz šīs plāksnes un konstatējat, ka tajā ir 179 kolonijas. Tas nozīmē, ka 0,5 ml atšķaidījuma 1: 100 satur 179 KVV. Bet kā ar sākotnējo paraugu?
Kas ir CFU aprēķins?
Tagad, kad jums ir daži dati, varat veikt CFU aprēķinu sākotnējā paraugā.
1. Paņemiet izkliedēto daudzumu (0,5 ml) un reiziniet ar atšķaidīšanas koeficientu (0,01), lai iegūtu 0,005. Tas jādara, lai atrastu atšķaidīšanas koeficientu, kas deva CFU skaitu. Šeit pusmiljons atšķaidījuma 1: 100 ļāva saskaitīt CFU.
2. Daliet CFU no atšķaidījuma (179) ar 1. darbības rezultātu (0,005), lai iegūtu 35 800 CFU.
Tas nozīmē, ka sākotnējais 1 ml atšķaidītā parauga satur 35 800 CFU. Vēl viens veids, kā to pateikt, ir teikt, ka sākotnējam paraugam ir 35 800 CFU / ml.
CFU ir lielisks rīks, lai atrastu, cik baktēriju, sēnīšu vai mikroorganismu ir attiecīgajā paraugā. Šeit aprakstītā apšuvuma metode ir īpaši noderīga ļoti koncentrētiem paraugiem vai organismiem, kas slikti aug šķidrā kultūrā.