Baktērijas tiek audzētas Petri trauciņos uz cietas barotnes, kas pazīstama kā baktēriju agars, kur veidojas paaugstinātas, apaļas kolonijas. Atšķirībā no atsevišķas baktēriju šūnas kolonija ir pietiekami liela baktēriju grupa, lai tā būtu redzama ar neapbruņotu aci. Baktēriju augšanu var izmērīt, vienkārši novērojot, cik daudz koloniju ir; tomēr kvantitatīvākās metodes ietver skaitīšanas kameras izmantošanu vai biežāk dzīvotspējīgu plākšņu skaitīšanu. Pēdējais tiek izmantots visbiežāk, jo tas sniedz arī kvalitatīvu informāciju, piemēram, dažādu augšanas apstākļu ietekmi. Tā kā Petri trauciņā varētu būt miljardiem baktēriju, vispirms mērot, paraugu jāatšķaida tā, lai būtu iespējams saskaitīt koloniju skaitu.
Testa mēģenē pievienojiet 10 mikrolitrus baktēriju sākuma kultūras 90 mikrolitriem atšķaidīšanas barotnes. Cieši aizveriet mēģenes vāku un viegli virpuļojiet, lai iegūtu viendabīgu maisījumu. Tagad paraugs ir viena desmitā daļa no sākotnējās koncentrācijas.
10 mikrolitrus šī jaunā parauga pārnes uz jaunu mēģeni, kurā ir 90 mikrolitri atšķaidīšanas barotnes, vēlreiz samaisa. Rezultāts atkal būs parauga atšķaidījums - tagad tas būs simtdaļa no tā sākotnējās koncentrācijas. Atkārtojiet to vairākas reizes, līdz sākotnējais paraugs ir atšķaidīts starp 10
Uz agara plāksnes izlej 10 mikrolitrus pēdējās atšķaidīšanas. Izmantojot izkliedējamo malu, baktēriju šķīdumu izklāj pa visu agara plāksnes virsmu. Atkārtojiet to vēl divām plāksnēm. Salīdzināšanai šīs darbības veic arī ar citiem atšķaidīšanas līmeņiem. Pārliecinieties, vai esat iezīmējis plākšņu dibenu. Uzlieciet katras plāksnes vākus un ļaujiet agara plāksnēm vairākas minūtes nožūt uz laboratorijas stenda zem liesmas vai inkubatorā. Plātnes ievieto inkubatorā, kam jābūt iestatītam uz baktēriju celmam piemērotu temperatūru. Atstāj augt 12 līdz 16 stundas.
Kolonijām jābūt redzamām pēc 16 stundām; tomēr dažām ģenētiskām modifikācijām var būt nepieciešams ilgāks laiks (piemēram, krāsu attīstība). Kad kolonijas ir novērojamas, izņemiet plāksnes un atrodiet tās, kurās ir no 30 līdz 300 kolonijām. Izmantojot pastāvīgu marķieri, novietojiet punktu uz petri trauka dibena - sānu ar agaru, nevis vāku - visur, kur caur agaru ir redzama kolonija. Saskaitiet katru marķiera punktu. Atkārtojiet katru ēdienu.
Lai izmērītu baktēriju daudzumu sākuma kultūrā šim eksperimentam, atšķaidījums aprēķinos jāmaina otrādi. Pirmkārt, kad no testa mēģenes paņēmāt vienu mikrolitru, lai ievietotu Petri trauciņā, paņēmāt vienu desmito daļu atšķaidītā parauga, tāpēc jums viss jāreizina ar 10, lai to mainītu. Turklāt, ja atšķaidīšanas koeficients mēģenē bija, piemēram, 10-7, tad koloniju skaits jāreizina ar 107 lai mainītu atšķaidīšanas efektu. Aprēķinos vienkārši noņemiet negatīvo zīmi no eksponenta. Izmantojiet formulu:
[Saskaitīto koloniju skaits] × 10 × [cik reizes paraugs jāreizina, lai sasniegtu sākotnējo koncentrāciju: piemēram, 105] = Kolonijas veidojošo vienību (CFU) skaits uz mililitru sākuma kultūras. Tas ir baktēriju augšana jūsu petri traukos.