Chemikai naudoja didelio efektyvumo skysčių chromatografiją arba HPLC, kad atskirtų junginių mišinius. Apskritai metodas yra mėginio įpurškimas į kolonėlę, kurioje jis sumaišomas su vienu ar daugiau tirpiklių. Skirtingi junginiai skirtingu laipsniu adsorbuoja arba „prilimpa“ prie kolonos; tirpikliui stumiant junginius per kolonėlę, vienas iš mišinio komponentų pirmiausia išeis iš kolonos. Prietaisas nustato junginius, kai jie išeina iš kolonos, ir sukuria chromatogramą, kurią sudaro diagrama su sulaikymo trukme x ašyje ir signalo intensyvumu nuo detektoriaus y ašyje. Kai junginiai išeina iš kolonos, chromatogramoje susidaro „smailės“. Apskritai, kuo toliau ir kuo siauresnės chromatogramos smailės, tuo didesnė skiriamoji geba. Mokslininkai mano, kad 1,0 ar didesnė skiriamoji geba yra tinkamas atskyrimas.
Išmatuokite dviejų gretimų smailių pločius chromatogramoje, pažymėdami, kur kiekvienos smailės pagrinde yra x ašies vertės. „X“ ašis rodo sulaikymo laiką, paprastai matuojamą sekundėmis. Taigi, jei smailė prasideda 15,1 sekundės ir baigiasi 18,5 sekundės, jos plotis yra (18,5 - 15,1) = 3,4 sekundės.
Nustatykite sulaikymo trukmę, pažymėdami laiką, t. Y. Vietą x ašyje, atitinkančią smailių maksimų vietas. Ši vertė paprastai bus maždaug pusiaukelėje tarp dviejų verčių, naudojamų apskaičiuojant plotį 1 veiksme. Pavyzdžiui, 1 žingsnyje pateiktame pavyzdyje maksimumas būtų apie 16,8 sekundės.
Apskaičiuokite raišką R tarp dviejų smailių:
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0,5 (W_1 + W_2)}
kur RT1 ir RT2 rodo 1 ir 2 smailių ir W sulaikymo laiką1 ir W2 vaizduoja smailių, paimtų jų pagrindu, pločius. Tęsiant pavyzdį nuo 2 ir 3 žingsnių, vienos smailės sulaikymo laikas yra 16,8 sekundės, o plotis - 3,4 sekundės. Jei antrosios smailės sulaikymo laikas būtų 21,4 sekundės, o plotis - 3,6 sekundės, skiriamoji geba būtų tokia:
R = \ frac {21,4-16,8} {0,5 (3,4 + 3,6)} = 1,3
Dalykai, kurių jums prireiks
- HPLC chromatograma
- Skaičiuoklė