Atlikę DNR mėginius ant agarozės gelio ir nufotografavę, galite išsaugoti paveikslėlį vėlesniam laikui, tada galėsite analizuoti rezultatus ir juos interpretuoti. Tai, ko ieškote, priklausys nuo jūsų eksperimento pobūdžio. Pavyzdžiui, jei atliekate DNR pirštų atspaudus, turėtumėte palyginti DNR gabalėlių dydį iš dviejų mėginių - galbūt iš įtariamojo ir iš nusikaltimo vietos mėginio. Priešingai, jei dirbate su bakterijų plazmidėmis, gali tekti įsitikinti, kad plazmidėje yra intarpas. Taigi, kaip jūs interpretuosite savo gelį, iš dalies priklausys nuo jūsų atlikto eksperimento. Nepaisant to, yra keletas bendrų taisyklių, kurias galite taikyti.
Atminkite, kad jums gali tekti naudoti šio skyriaus instrukcijas arba neprireikti. Elektroforezė agarozės geliu dažnai naudojama siekiant patvirtinti, kad plazmidėje yra nurodytas intarpas. Jei nedirbate su plazmidėmis, galite praleisti šį skyrių. Jei taip, galite laikytis šių instrukcijų.
Atkreipkite dėmesį, kad jei dirbate su nepjaustytomis ar prikimštomis plazmidėmis, negalite įvertinti dydžio naudodamiesi aukščiau pateikto 1 skyriaus procedūra. Taip yra todėl, kad nepjautos ir prikauptos plazmidės migruoja skirtingais greičiais nuo linijinės DNR.
Palyginkite juostų skaičių kiekvienoje juostoje. Primename, kad restrikcijos fermentas pjauna DNR tose vietose, kur atsiranda tam tikra seka, vadinama restrikcijos vieta. Jei mėginys buvo apdorotas DU restrikcijos fermentų, juose turėtų būti intarpo juosta ir likusios plazmidės juosta. Taip yra todėl, kad intarpą ribos dvi restrikcijos vietos, kiekviena skirtingo fermento, todėl pjūviai abiejose šiose vietose atlaisvins intarpą iš plazmidės. Pjūvis tik vienoje vietoje, priešingai, pavers plazmidę tiesine DNR. Tada mėginyje, kuriame nėra restrikcijos fermentų, arba vieno restrikcijos fermento, turėtų būti viena juosta, o mėginyje, kuriame buvo supjaustyti du restrikcijos fermentai, turėtų būti dvi juostos.
Atkreipkite dėmesį į juostas, kurias sukuria sugalvota plazmidinė DNR. Susikaupusi plazmidė turi išpjovą tik vienoje grandinėje, todėl ji migruoja lėčiau nei perpjauta plazmidė. Iškirptos plazmidės savo ruožtu migruoja lėčiau nei nepjaustytos DNR.
Įvertinkite intarpo dydį naudodamiesi 1 skyriuje aprašyta procedūra ir nustatykite, ar jis atitinka jūsų lūkesčius (kurie skirsis priklausomai nuo eksperimento.)
Dalykai, kurių jums prireiks
- Pieštukas
- Popierius
- Skaičiuoklės programa
- Jūsų gelio paveikslėlis
- Liniuotė