Kaip veikia automatinis DNR sekvenceris?

Mokslininkai turi galimybę nustatyti DNR molekulės seką; kitaip tariant, jie gali nustatyti bet kurios molekulės nukleotidų bazių tvarką. DNR molekulės sekvenavimas gali būti pirmasis iš daugelio žingsnių, reikalingų norint išsiaiškinti, koks yra specifinis DNR molekulės nukleotidai sąveikauja tarpusavyje ir koduoja skirtingas anatomines savybes organizmas. DNR sekvenavimo procesas yra gana įtrauktas, tačiau automatiniai DNR sekvenceriai sumažina reikalingą žmogaus dalyvavimą bent dalyje proceso.

Mėginio paruošimas

Kad veiktų automatinis DNR sekvenceris, jis turi aptikti keturias DNR sudarančias nukleotidų bazes: adeniną, guaniną, timiną ir citoziną. Mokslininkai daug kartų kopijuoja DNR dalį ir, naudodami restrikcijos fermentus, supjausto DNR į įvairaus dydžio gabalėlius. Tada jie prideda nedidelį kiekį fluorescuojančios žymėtos bazės prie kiekvienos DNR partijos. Pagrindas, kuris yra arba adeninas, ir timinas, ir guaninas, arba citozinas, prisijungs prie jo bazės komplimento grandinės gale. Pavyzdžiui, adeninas prisijungs prie sruogų, kurios baigiasi timinu, o guaninas - su sruogomis, kurios baigiasi citozinu.

instagram story viewer

Automatinė DNR sekvencerio konstrukcija

Automatinis DNR sekvenceris yra sukonstruotas panašiai kaip DNR sekvenceris, reikalaujantis daugiau rankų darbo. Tiksliau, automatinis DNR sekvenceris yra maždaug 1 pėdos ilgio rezervuaras su 96 gelio šulinėliais, į kuriuos galima pilti DNR. Automatiniame DNR sekvenceryje, kaip ir bet kuriame DNR sekvenceryje, DNR įšvirkščiama į gelio duobutes rezervuaro viršuje, o į tą rezervuaro galą įdedamas neigiamas krūvis. Neigiamas krūvis suteikia stiprų impulsą DNR sruogoms nueiti skirtingus atstumus iki bako galo.

Automatinis įpurškimas

Automatinis DNR sekvenceris DNR partijas automatiškai suleidžia į gelio viršų. Tai leidžia mokslininkams sutaupyti nepaprastai daug laiko ir pastangų. Įpurškus serijas, sekvenceris automatiškai uždeda neigiamą krūvį į vieną rezervuaro galą, todėl sruogos migruoja skirtingu atstumu per gelį. Skirtingi atstumai atspindi skirtingus DNR gijų, einančių per gelį, dydžius.

Detektorius

Yra sukurta daugybė automatinių DNR sekos aparatų, kad būtų galima aptikti fluorescuojančius dažus ant DNR gijų, einančių per gelį. Tai darydami jie gali nustatyti nukleotidus, esančius sruogų galuose, ir įrašyti juos į kompiuterį. Tačiau sekvenceriai geriausiu atveju pateikia suskaidytą DNR nukleotidų versiją. Panaudoję automatinę DNR sekos nustatymo mašiną, turite pereiti procesą, vadinamą „apdaila“, kuriame derinami kompiuteriai ir tyrėjai surenka DNR grandinės aptikimo rezultatus, kad surinktų duomenis į išsamų DNR aprašymą sruoga. Nenuostabu, kad šis procesas gali užtrukti daug ilgiau nei tikrasis sekos nustatymo procesas.

Teachs.ru
  • Dalintis
instagram viewer