TA klonavimas yra paprastas ir patogus polimerazės grandininės reakcijos (PGR) produktų subklonavimo metodas. „TA“ yra trumpinys „timinas“ ir „adeninas“. Ši klonavimo technika naudoja timino gebėjimą hibridizuotis su adeninu esant ligazėms. Ribojimo fermentai nenaudojami, skirtingai nei tradicinis subklonavimo metodas. Vietoj to, PGR produktai sustiprinami naudojant Taq polimerazių fermentus.
Metodas
TA klonavimo metodas naudoja tam tikros dezoksiribonukleino rūgšties perdangos galinį transferazės aktyvumą kiekviename PGR produkto gale.
Linijuotas klonavimo vektorius, turintis vieną, tris pagrindinius T (3'-T) iškyšus, vadinamas T vektoriu, naudojamas klonuoti šį PGR produktą į plazmidės vektorių. PGR produktas sumaišomas su šiuo vektoriu didele proporcija.
Į mišinį pridedama DNR ligazė (T4 ligazė), kuri leidžia dviems produktams hibridizuotis ir susijungti.
Privalumai ir trūkumai
TA klonavimas yra patogus PCR produktų subklonavimo būdas linearizuotame vektoriuje, jis yra daug paprastesnis ir greitesnis nei tradiciniai subklonavimo metodai. Kadangi taikant šį metodą nenaudojami restrikcijos fermentai, galima klonuoti produktus, kuriuose nėra restrikcijos fermentų vietų.
Trūkumas yra tas, kad TA klonavimo rinkiniai yra labai brangūs, todėl jų naudojimas yra ribotas. Be to, nėra kryptingo klonavimo; taigi klonavimo priešinga kryptimi tikimybė yra didesnė.
TA klonavimo rinkiniai
Keletas gamintojų parduoda TA klonavimo rinkinius. Kai kurie yra „Invitrogen“, „QIAGEN“ ir „Premier Biosoft“.