Gelio elektroforezė yra vienas iš pagrindinių metodų, naudojamų molekulinėje biologijoje DNR analizei. Šis metodas apima DNR fragmentų migraciją per gelį, kur jie yra atskiriami pagal dydį ar formą. Tačiau net ir moksliškai pagrįstas metodas, pvz., Gelio elektroforezė, nėra apsaugotas nuo klaidų.
Kaip veikia elektroforezė
•••Jezperklauzen / iStock / Getty Images
Gelio elektroforezė apima gelio, paprastai pagaminto iš polimerų, tokių kaip agarozė, naudojimą. Gelis panardinamas į buferinį tirpalą, kuris praleidžia elektrinį lauką. Dominantis DNR mėginys pirmiausia fragmentuojamas, naudojant restrikcijos fermentus, ir tada įšvirkščiamas į gelį. Įjungus elektrinį lauką, gelyje esantys DNR fragmentai migruoja link teigiamojo elektrodo. Jei DNR fragmentai yra skirtingo dydžio, tada kiekvieno dydžio fragmento migracijos laikas bus skirtingas. Tada fragmentai vizualizuojami naudojant dažus arba autoradiografiją ir yra matomi kaip juostos gelyje.
Mėginio užteršimas
•••aiaikawa / iStock / Getty Images
Pagrindinė elektroforezės paskirtis yra DNR analizės molekulinėje biologijoje priemonė, tačiau ji taip pat naudojama kriminalistikoje kaip priemonė nustatyti mėginius iš nusikaltimo vietos. Norint gauti tikslius rezultatus, svarbu kuo labiau sumažinti šios technikos klaidų šaltinius. Vienas klaidų šaltinis yra DNR mėginio užteršimas. Jei mėginyje yra svetimos DNR, gelyje bus daugiau juostų, nei būtų gelyje, kuriame yra tik išgrynintas mėginys.
Problemos su geliu, srove ir buferiu
•••IndiaImages / iStock / Getty Images
Gelio koncentracija taip pat turi būti teisinga, kad būtų išvengta klaidų. Jei koncentracija yra per didelė arba per maža, fragmentai migruos arba per lėtai, arba per greitai. Tai sukels klaidų sprendžiant skirtingas juostas. Elektroforezės metu reikia pasirūpinti, kad įtampa būtų pastovi. Bet kokie įtampos svyravimai sukels netikrą DNR fragmentų migraciją, dėl kurios atsiras klaidų nuskaitant juostas. Buferinis tirpalas taip pat turi būti tinkamos sudėties, nes netinkamo pH ar jonų koncentracijos buferis pakeis DNR fragmentų formą, taip pat pakeis jų migracijos laiką.
Tinkama vizualizacija
•••„Ingram Publishing“ / „Ingram Publishing“ / „Getty Images“
Svarbiausia, kad gelis turi būti tinkamai vizualizuotas. Jei mėginių vizualizavimui naudojamo dažiklio arba radioaktyvaus zondo koncentracija yra per didelė, gautas vaizdas bus labai netvarkingas, nes bus matomi ir likę fragmentai. Jei gelio koncentracija yra per maža, vizualizacijos nebus. Kai visais etapais bus laikomasi teisingų procesų, gelio elektroforezė duos tikslius ir labai patikimai naudojamus rezultatus. Kaip ir visose mokslinėse procedūrose, gelio elektroforezėje gali būti klaidų, tačiau jas tinkamai sumažinti ir tinkamai paruošti.