Vienas iš klasikinių mikrobų koncentracijos mėginyje nustatymo būdų yra mėginio atskiedimas, mikrobų auginimas lėkštėse ir kolonijų skaičiavimas. Padengti mikrobai iš koloniją sudarančio vieneto, susidedančio iš vienos ar kelių ląstelių, išauga į matomą koloniją, kurią galima pamatyti ir suskaičiuoti. Bakterijos yra labiausiai paplitęs mikrobas, vertinantis naudojant plokštelių skaičių. Kolonijos skaičiuojamos mikrobams dirvožemyje, vandenyje ir maiste aptikti ir suskaičiuoti. Kolonijų skaičiavimo protokoluose pabrėžiamas tikslus ir metodiškas požiūris.
Mėginių skiedimas, dengimas ir inkubavimas
Jei paprasčiausiai ištepsite mikrobo mėginį ant agaro plokštelės, pamatysite tiek daug kolonijas sudarančių vienetų, kad atskiros kolonijos susimaišys, todėl jų neįmanoma suskaičiuoti. Norėdami išspręsti šią problemą, sumaišykite mėginį į skystą terpę, paimkite nedidelį kiekį to mišinio ir toliau jį atskieskite. Pakartokite šį procesą nuo šešių iki 10 kartų. Paskirstykite galutinį praskiedimą ant agaro plokštelės ir inkubuokite keturias ar septynias dienas, kol suskaičiuosite kolonijas.
Rankinis skaičiavimas
Pagrindinis kolonijų skaičiavimo triukas yra skaičiuoti kiekvieną kolonijos tašką vieną kartą. Vienas iš būdų yra nustatyti Petri lėkštelę ant tinklelio fono ir suskaičiuoti kolonijas kiekvienoje tinklelio ląstelėje, metodiškai judant per visas ląsteles. Suskaičiuotų kolonijų žymėjimas ant Petri lėkštelės galo taip pat gali būti naudingas būdas. Paprastai turėsite suskaičiuoti bent tris plokštes; tvirtoms išvadoms daryti naudokite tik plokštes, kuriose yra 30–300 kolonijų, siūlo mikrobiologijos tinklas - įmonė, teikianti konsultavimo paslaugas laboratorijoms ir gamintojams. Plokštės, kuriose kolonijų yra per daug, kad būtų galima suskaičiuoti, arba per mažai kolonijų, turi būti dengiamos iš naujo praskiedus.
Automatinis skaičiavimas
Žmogiškos klaidos padidina laiką, reikalingą kolonijoms skaičiuoti rankiniu būdu. Norėdami pagerinti tikslumą ir efektyvumą, įdėkite „Petri“ lėkštelę į automatinį kolonijų skaičiavimo prietaisą. Automatiniai kolonijų skaitikliai nufotografuoja patiekalą, išskiria kolonijas iš fono ir tada algoritmu suskaičiuoja kolonijas lėkštėje. Algoritmams gali kilti sunkumų atskiriant kolonijas, kai dvi ar daugiau kolonijų liečiasi kraštuose, todėl tai yra nuolatinio programinės įrangos kūrimo sritis.
Padaryti skaičiavimą sudėtingesniu
Mikrobų tankio apskaičiavimo iš kolonijų skaičiaus tikslumas turi tam tikrų apribojimų. Kolonijas formuojantys vienetai gali būti viena ląstelė, ląstelių grandinė arba visas ląstelių sankaupas. Daroma prielaida, kad kolonija atstovauja vienai ląstelei, todėl koncentracijos, apskaičiuotos pagal kolonijų skaičių, gali būti mažos. Skirtingiems mikrobams reikia skirtingų augimo sąlygų, o kolonijos lėkštėje atstovauja tik tuos mikrobus, kurie klesti toje augimo terpėje tokiomis inkubacinėmis sąlygomis. Be to, skaičiuojant kolonijas negyvos ląstelės neregistruojamos, o tai yra svarbus dalykas, kai reikia ląstelių koncentracijos pradiniame mėginyje.
