Aukšto efektyvumo skysčių chromatografija yra mišinio laboratorinės analizės metodas. Tai efektyvus chromatografijos tipas, naudojant mišinio mėginį per kolonėlę, o ne tiesiog gravitaciją, naudojant aukštą slėgį. Įpurškiamas mėginys, tada siurblys, kuriame yra didelis slėgis, padeda pajudinti mėginį supakuotoje kolonėlėje, kur jis padalijamas į atskirus komponentus. Po to detektorius analizuoja šį atskyrimą, kad gautų rezultatų.
Injekcijos vieta
Norint įšvirkšti į HPLC, mėginys pirmiausia turi būti ištirpintas poliariniame skystame tirpiklyje, geriausiai tame, kuriame yra žinomi HPLC spektrai, kad jo duomenis būtų galima atskirti nuo mėginio. Skystas tirpalas, kuriame yra mėginys, dedamas į prietaisą ir siunčiamas į kolonėlę. Faktinė injekcijos vietos vieta priklauso nuo instrumentų prekės ženklo. Daugeliu atvejų injekcijos procesas yra automatizuotas, tačiau kai kuriais atvejais laboratorijos darbuotojas turi suleisti mėginį naudodamas mažą švirkšto adatą.
Siurblio komponentas
HPLC įrenginio siurblio komponentas yra būtinas, nes jis suteikia slėgį, kuris bandinį išstumia per kolonėlę. Siurblio stiprumas skiriasi, tačiau galingas gali sukelti iki 6000 psi arba svarų viename kvadratiniame colyje slėgį, kuris taikomas įpurškus mėginį. Tai leidžia mėginiui prasiskverbti pro kolonėlę greičiau ir efektyviau, nei tada, kai jis lašėtų pro jį naudodamas tik sunkio jėgą.
Stulpelio aprašymas
Padidėjęs mėginio, per kolonėlę perduodamo kolonėlę, greitis leidžia naudoti kitokio tipo kolonėles nei tos, kurios naudojamos paprastoje skysčių chromatografijoje. Kolonėlės pakavimo medžiagos dalelės gali būti daug mažesnės, o tai padidina paviršiaus plotą, todėl padeda mėginiui sąveikauti su kolona. Dauguma HPLC kolonų veikia per poliškumą. Mėginys ištirpinamas poliariniame tirpiklyje, o kolonėlę sudaro daugiausia nepoliniai angliavandeniliai. Polinės mėginio molekulės dalys labai greitai praeina per kolonėlę, nes jos pirmiausia sąveikauja su tirpiklio, tuo tarpu nepoliniai mėginio komponentai užsitęsia kolonoje, formuodami silpną sąveiką su kolona komponentai. Todėl mėginio komponentai nusileidžia nuo kolonos nuo poliarinio iki nepolinio.
Detektoriaus funkcija
Detektoriai taip pat skiriasi priklausomai nuo naudojamo HPLC prietaiso tipo. Tačiau dauguma veikia tuo pačiu pagrindiniu būdu. Ultravioletinės šviesos šaltinis šviečia ant atskirų mėginio komponentų, kai jie išeina iš kolonos. Dauguma organinių junginių sugeria tam tikrą šviesos kiekį, todėl eidami pro taikomą šviesos pluoštą, detektorius gali paimti, kiek šviesos sugeria. Detektorius taip pat užfiksuoja komponentų sulaikymo laiką, atsižvelgdamas į jų išstumimo iš kolonos tvarką. Tada šią išvestį galima analizuoti remiantis smailės plotu, kad būtų nustatytas tikslus mėginio komponentų pobūdis.