화학자들은 고성능 액체 크로마토 그래피 또는 HPLC를 사용하여 화합물 혼합물을 분리합니다. 일반적으로이 방법은 하나 이상의 용매와 혼합되는 컬럼에 샘플을 주입하는 것으로 구성됩니다. 서로 다른 화합물이 컬럼에 서로 다른 각도로 흡착 또는 "고착"합니다. 용매가 화합물을 컬럼을 통해 밀어 내면 혼합물의 성분 중 하나가 먼저 컬럼을 빠져 나갑니다. 기기는 화합물이 컬럼에서 나올 때이를 감지하고 x 축의 머무름 시간과 y 축의 검출기에서 나오는 신호 강도가있는 플롯으로 구성된 크로마토 그램을 생성합니다. 화합물이 컬럼을 빠져 나 가면서 크로마토 그램에서 "피크"를 생성합니다. 일반적으로 크로마토 그램에서 피크가 멀어지고 좁아 질수록 분해능이 높아집니다. 과학자들은 적절한 분리를 나타 내기 위해 1.0 이상의 해상도를 고려합니다.
x 축 값이 각 피크의 기저에있는 위치를 기록하여 크로마토 그램에서 인접한 두 피크의 폭을 측정합니다. x 축은 머무름 시간을 나타내며 일반적으로 초 단위로 측정됩니다. 따라서 피크가 15.1 초에서 시작하고 18.5 초에서 끝나는 경우 너비는 (18.5-15.1) = 3.4 초입니다.
시간, 즉 피크의 최대 값 위치에 해당하는 x 축의 위치를 기록하여 머무름 시간을 결정합니다. 이 값은 일반적으로 1 단계에서 너비를 계산하는 데 사용 된 두 값의 중간 정도입니다. 예를 들어 1 단계에서 주어진 예는 약 16.8 초에서 최대 값을 나타냅니다.
다음과 같이 두 피크 사이의 분해능 R을 계산합니다.
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0.5 (W_1 + W_2)}
RT1 및 RT2 피크 1과 2의 머무름 시간을 나타내고 W1 W2 베이스에서 취한 피크의 너비를 나타냅니다. 2 단계와 3 단계의 예를 계속하면 하나의 피크는 16.8 초의 머무름 시간과 3.4 초의 너비를 나타냅니다. 두 번째 피크가 3.6 초 너비에서 21.4 초의 머무름 시간을 나타내면 해상도는 다음과 같습니다.
R = \ frac {21.4-16.8} {0.5 (3.4 + 3.6)} = 1.3
필요한 것
- HPLC 크로마토 그램
- 계산자