과학자와 기술자는 종종 현탁액의 세포 농도를 계산해야합니다. 예를 들어, 환자가 의사 사무실에서 혈액을 채취하면 실험실에서는 특정 방법을 사용하여 주어진 혈액량에서 백혈구의 양을 찾을 수 있습니다. 이것은 의사에게 환자의 건강, 특히 그의 면역 체계와 그가 감염 또는 다른 질병과 싸우고 있는지에 대한 많은 정보를 제공합니다. 이와 같은 검사는 가임 목적을 위해 정액의 정자 세포 수와 같은 척수액 및 기타 체액뿐만 아니라 혈액에서 다른 많은 세포를 찾을 수 있습니다. 과학자들은 또한 생태학 연구에서 산업 기술에 이르기까지 다양한 목적을 위해 박테리아, 효모 및 기타 미생물의 세포 농도를 계산합니다. 가장 일반적인 기술 중 하나는 많은 대학 생물학 수업에서도 가르치며 계수 챔버라는 장치를 사용합니다.
세포 현탁액이 계수 챔버로 들어가기 전에 수천 또는 수백만 개의 세포를 포함 할 수 있기 때문에 희석이 필요할 수 있습니다. 이 경우 세포를 합리적으로 계산할 수 없습니다. 샘플을 희석하려면 멸균 피펫을 사용하여 90 마이크로 리터의 희석제가 들어있는 테스트 튜브에 세포 용액 10 마이크로 리터를 넣습니다. 희석제의 유형은 세포 유형에 따라 다릅니다. 잘 섞는다. 이 용액은 이제 초기 샘플보다 10 배 더 희석되므로 희석 계수는 10입니다.-1. 라벨을 붙입니다. 용액이 충분히 희석 될 때까지 매번 멸균 피펫을 사용하여 이것을 여러 번 반복합니다. 두 번째로 희석하면 두 번째 시험관이 초기 용액보다 100 배 더 희석되었으므로 희석 계수는 10입니다.-2 등등.
계수 챔버에 적합한 희석 계수를 결정하기 위해 여러 희석을 시도해야 할 수 있습니다. 계수 챔버는 기본적으로 정확한 깊이와 상단에 정확한 격자가 새겨진 매우 작고 투명한 직사각형 상자입니다. 혈구 계 또는 때때로 혈구 계라고도합니다. 목표는 서스펜션이 충분히 희석되어 계수 챔버에서 볼 때 세포가 겹치지 않고 균일 한 방식으로 그리드 전체에 분포하는 것입니다. 세포를 포함하는 희석 된 현탁액을 계수 챔버의 우물에 피펫하여 모세관 작용을 통해 그리드 챔버에 정착합니다. 계수 챔버를 현미경 스테이지에 놓고 저전력으로 봅니다.
그리드에는 더 작은 정사각형으로 구성된 정사각형이 포함됩니다. 4 개 또는 5 개의 사각형을 선택하거나 4 개 모서리 및 중앙 사각형과 같은 선택한 패턴으로 최소 100 개의 셀을 계산해야합니다. 셀이 크면 큰 정사각형 일 수 있지만 셀이 작 으면 작은 정사각형을 대신 선택할 수 있습니다.
각 격자 사각형의 특정 부피는 챔버 제조업체의 계수에 따라 다를 수 있지만 종종 챔버의 깊이는 0.1입니다. 밀리미터, 큰 정사각형의 면적은 1 제곱 밀리미터이고 작은 정사각형의 면적은 0.04 제곱입니다 밀리미터. 그러면 더 큰 정사각형의 부피는 0.1 입방 밀리미터입니다. 이 예에서는 5 개의 사각형에 총 103 개의 셀을 세고 희석 계수가 10이 될 때까지 초기 샘플을 희석했다고 가정합니다.-2.
각 격자 사각형의 부피가 0.1 입방 밀리미터이고 5 개가 계산되면 계산 된 챔버의 총 부피는 0.5 입방 밀리미터이고 103 개의 셀이 있습니다. 두 배로 1 입방 밀리미터로 만들면 206 개의 셀이됩니다. 1 입방 센티미터는 1 밀리리터에 해당하며 액체 측정에 유용합니다. 입방 센티미터에는 1,000 입방 밀리미터가 있습니다. 따라서 세제곱 센티미터 또는 1 밀리리터의 현탁액이 있었다면 206,000 (206 x 1,000) 세포를 세었을 것입니다. 이것은 방정식으로 보이는 것입니다.
격자 사각형의 부피 × 계산 된 사각형의 수 = 계산 된 서스펜션의 총 부피
세포 수 ÷ 계산 된 현탁액의 부피 = 입방 밀리미터 당 세포 수
밀리미터 입방체 당 세포 수 × 1000 = 밀리미터 당 세포 수
현미경으로 초기 용액을 계산할 수 있도록 수행 한 모든 희석을 고려해야합니다. 이 예에서 희석 계수는 10입니다.-2. 용액의 초기 농도를 계산하려면 :
밀리 리터당 세포 수 ÷ 희석 계수 = 세포 농도
이 예에서 밀리 리터당 세포 수는 206,000이고이를 10으로 나눕니다.-2 (0.01)은 초기 샘플에서 밀리 리터당 20,600,000 세포의 세포 농도를 제공합니다.