겔 전기 영동에서 DNA 또는 단백질 샘플은 일반적으로 크기에 따라 분리되어 겔을 통해 이동하도록하는 전기장을 적용합니다. 겔 전기 영동의 사용은 생의학 연구실에서 일상적으로 이루어지며 다양한 질문에 답하는 데 사용되므로 결과를 분석하는 보편적 인 방법은 없습니다.
예를 들어 Western blotting, Northern blotting 및 Southern blotting과 같은 다양한 기술에는 모두 겔 전기 영동.
당신이하고 있다면 아가 로즈 젤 가장 일반적인 절차 인 DNA 샘플의 전기 영동은 일반적으로 최소한 두 가지 작업을 수행해야합니다. 삽입물, 닉 플라스미드 및 절단 플라스미드의 플라스미드 및, 2) 표준 곡선 Excel을 사용하여 다양한 DNA 단편의 크기를 추정하거나 계산자.
실험실 노트북을 확인하여 어떤 샘플이 어떤 레인에로드되었는지 확인하십시오. 겔용 웰을로드 할 때 각 레인 / 샘플의 ID를 기록해야합니다.
눈금자를 사용하여 우물에서 추적 염료까지 사진의 거리를 측정하면 어떤 DNA 밴드보다 더 멀리 이동했습니다 (즉, 젤라틴). 이 숫자를 기록하십시오-사용하는 단위는 중요하지 않습니다.
우물에서 "사다리"의 각 밴드까지의 거리를 측정 한 다음 그 거리를 추적 염료 밴드. 이 계산은 각 대역의 상대적 이동성을 제공합니다.
예: 추적 염료 밴드가 6 인치 이동하고 5, 4.5 및 3.5 인치 이동 한 3 개의 밴드가 있다고 가정합니다.
그들의 상대적 이동성은 무엇입니까? 답: 0.833, 0.75, 0.5833의 상대적 이동성을 얻기 위해 5, 4.5, 3.5를 6으로 나눕니다.
제조업체는 공급하는 사다리에있는 각 조각의 크기를 제공하므로 이미이 정보가 있어야합니다.
스프레드 시트 프로그램에서 추세선 기능을 사용하여 방정식을 데이터에 맞 춥니 다. 이 방정식은 거듭 제곱 방정식 (예: x ^ -2)이어야하며 데이터에 비교적 잘 맞아야합니다 (R 계수가 0.9 이상). 이것은 커브와 표준 커브를 만듭니다 뛰어나다.
작은 DNA 조각은 큰 DNA 조각보다 젤을 통해 더 멀리 이동하므로 추적 염료에 가장 가까운 조각이 가장 작습니다. 그러나
플라스미드 (원형) DNA는 잘리지 않고 "초코 일"상태가되거나 전화 코드처럼 꼬여서 실제로 이동하게됩니다. 더 멀리 같은 크기의 선형 DNA보다마찬가지로 불완전하게 절단 된 "nicked"플라스미드는 짧게 동일한 크기의 선형 DNA보다 거리. 따라서 젤에서 절단되지 않은 플라스미드의 크기를 추정 할 수 없습니다.
각 레인의 밴드를 해당 레인에로드 한 샘플의 식별 정보와 일치시키고 표시되는 내용이 예상 한 것인지 결정합니다. 이것은 실험의 성격에 따라 다릅니다.
그러나 일반적으로 두 개의 제한 효소로 삽입 플라스미드를 소화하면 삽입물이 플라스미드에서 제거 될 것으로 예상 할 수 있습니다.
플라스미드보다 훨씬 작기 때문에 해당 차선에서 두 개의 밴드를 볼 수 있습니다. 하나는 상단 근처에 다른 하나는 하단 근처에 있습니다. 단 하나의 제한 효소로 절단 된 플라스미드는 두 개로 절단 된 플라스미드보다 조금 더 멀리 이동하는 단일 밴드 만 형성해야합니다. 제한 효소, 그러나 인서트만큼 멀지 않습니다.
우물에서 절단 된 플라스미드까지의 거리를 측정하고 눈금자로 밴드를 삽입합니다. 이 숫자를 추적 염료가 이동 한 거리로 나누어 삽입물과 절단 플라스미드의 상대적 이동성을 찾습니다.