주어진 샘플에서 특정 단백질을 찾아내는 데 사용되는 분석 기술인 웨스턴 블롯은 효소 또는 형광 표지 된 1 차 항체가 특정 항원에 결합하는 능력을 사용합니다. 겔 전기 영동으로 시작하여 막 블로 팅 및 항체로 프로빙하는 3 단계 프로세스입니다. 단백질 검출은 직접 또는 간접적 일 수 있으며, 후자는 1 차에 대한 표지 된 2 차 항체를 사용합니다. 일상적인 단백질 분석 기술로 받아 들여지지 만, 웨스턴 블롯에는 한계와 이점이 있습니다.
장점: 감도
서양 얼룩에 찬성하는 가장 큰 주장 중 하나는 감도입니다. 샘플에서 0.1 나노 그램의 단백질을 검출 할 수있는 능력 때문에이 기술은 이론적으로 다음과 같은 역할을 할 수 있습니다. 효과적인 조기 진단 도구로 환자의 바이러스 또는 박테리아의 아주 작은 면역 원성 반응도 감지합니다. 견본. 간접 웨스턴 블롯은 이미징 시스템에 의해 감지 된 신호의 강도를 증폭하는 2 차 항체의 능력에서이 감도를 더욱 강화합니다. 감도가 높으면 검사에 필요한 항체가 적어 실험실 비용이 크게 절감됩니다.
장점: 특이성
웨스턴 블롯 기법은 두 가지 큰 기여 요인에 특이성이 있습니다. 첫째, 겔 전기 영동은 샘플을 다양한 크기, 전하 및 형태의 단백질로 분류합니다. 겔에 형성된 밴드는 이미 관심있는 단백질 또는 폴리펩티드의 크기에 대한 단서를 제공하기 때문에이 과정 자체는 탐지를 향한 큰 단계입니다. 항체-항원 상호 작용의 특이성은 두 번째 큰 요인으로 작용합니다. 특정 항체는 특정 단백질에 대한 친 화성을 나타 내기 때문에이 공정은 300,000 개의 서로 다른 단백질의 혼합물에서도 표적 단백질을 선택적으로 검출 할 수 있습니다.
단점: 잘못된 결과 나 주관적인 결과가 발생하기 쉽습니다.
민감도와 특이성에도 불구하고 웨스턴 블롯은 여전히 잘못된 결과를 생성 할 수 있습니다. 항체가 의도하지 않은 단백질과 반응 할 때 위양성 결과가 발생합니다. HIV 검사를받는 환자가 결핵이나 기생충에 걸렸을 때 발생합니다. 감염. 반면에 위음성은 더 큰 단백질이 막으로 적절하게 전달되는 데 충분한 시간이 주어지지 않으면 쉽게 발생할 수 있습니다. 부적절한 블로 팅 및 처리는 종종 비뚤어 지거나 희미 해 지거나 여러 밴드를 생성하여 기술자의 해석에 따라 테스트 결과를 만듭니다.
단점: 높은 비용 및 기술 수요
웨스턴 블롯의 비용은 태그가 달린 항체, 숙련 된 분석가 및 실험실 장비에 대한 대규모 개별 지출의 복합입니다. 섬세한 프로세스 인 웨스턴 블로 팅은 샘플 성분의 적절한 식별을 위해 모든 단계에서 정밀성을 요구합니다. 시약 농도 또는 잠복기의 사소한 오류는 전체 프로세스에 재앙이 될 수 있습니다. 마지막으로, 화학 발광, 형광, 방사성 또는 레이저 검출 시스템과 같은 검출 및 이미징에 필요한 장비는 평균 미생물학 장치에 비해 너무 비쌀 수 있습니다.