웨스턴 블로 팅은 생화학 실험실에서 가장 일반적인 절차 중 하나입니다. 기본적으로 샘플에서 단백질을 크기별로 분리 한 다음 항체를 사용하여 특정 단백질이 존재하는지 여부를 확인합니다. 연구뿐만 아니라 의료 또는 진단 실험실에서도 유용합니다. 예를 들어, HIV와 라임 병에 대한 검사는 효소 결합 면역 흡착 분석 (ELISA) 검사와 ELISA가 양성인 경우 웨스턴 블롯을 포함합니다. 그러나 그 인기에도 불구하고 웨스턴 블로 팅에는 몇 가지 단점이 있습니다.
비 정량
고전적인 서양 얼룩은 비 정량적입니다. 즉, 연구원들은 특정 단백질이 존재하는지 여부를 알 수 있지만 존재하는 단백질의 양을 정량화 할 수는 없습니다. 일부 생명 공학 회사는 현재 연구원이나 실험실 기술자가 양을 정량화 할 수있는 키트를 판매합니다. 표준 곡선을 사용하여 존재하는 단백질-그러나 이것은 동일한 단백질의 순수한 샘플이 유효한. 더욱이 단백질의 분자량은 질량 분석법과 같이 정확하게 측정하는 것이 아니라 웨스턴 블 롯팅으로 만 측정 할 수 있습니다.
항체
웨스턴 블롯은 관심있는 단백질에 대한 1 차 항체를 사용할 수있는 경우에만 수행 할 수 있습니다. 다양한 단백질에 대한 항체는 생명 공학 회사에서 구할 수 있지만 저렴하지는 않습니다. 특정 단백질에 대해 1 차 항체를 사용할 수없는 경우 해당 특정 단백질을 찾는 웨스턴 블롯을 수행 할 수 없습니다. 더욱이 연구자들은 단백질이 어떤 식 으로든 변형되었는지 여부를 확인하고자 할 수 있습니다. 예를 들어, 웨스턴 블롯 기술을 사용하면 변형 된 항체에 특이적인 항체가 필요합니다. 단백질.
훈련
웨스턴 블롯을 제대로 수행하고 좋은 결과를 얻는 것은 어려울 수 있으므로 직원은 잘 훈련되어야합니다. 다른 많은 부분에서와 마찬가지로 경험은 아마도 최고의 교사 일 것입니다. 그러나 숙련 된 기술자라도 서양 얼룩은 시간이 많이 걸립니다. 예를 들어, 실험의 겔 전기 영동 부분은 일반적으로 실행하는 데 1 ~ 2 시간이 걸립니다. 물론 젤이 실행되는 동안 다른 작업을 수행 할 수 있지만 실험 결과를 얻는 데는 여전히 상당한 시간이 걸립니다.
기타 제한
항체는 때때로 일부 비 표적 결합을 나타내어 결과가 더 나빠질 수 있습니다. 또한 Western blotting에서는 특정 단백질에 대한 항체를 사용하므로 결과는 해당 단백질이 존재하는지 여부 만 알려줍니다. 대조적으로 고분해능 질량 분석법은 샘플에 존재하는 모든 단백질을 나타내며, 전통적인 웨스턴 블 롯팅과 달리 정량적입니다. 물론 질량 분석법은 웨스턴 블로 팅에 비해 훨씬 더 비싸고 사용하기가 기술적으로 더 어렵다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.