TA 클로닝은 PCR (polymerase chain reaction) 제품을 서브 클로닝하는 간단하고 편리한 방법입니다. "TA"는 "티민"과 "아데닌"의 줄임말입니다. 이 클로닝 기술은 리가 제의 존재 하에서 티민이 아데닌에 혼성화하는 능력을 활용합니다. 제한 효소는 기존의 서브 클로닝 방법과 달리 사용되지 않습니다. 대신, PCR 산물은 Taq 중합 효소를 사용하여 증폭됩니다.
방법
TA 클로닝 방법은 PCR 산물의 각 말단에 특정 데 옥시 리보 핵산 오버행의 말단 전이 효소 활성을 사용합니다.
T- 벡터라고하는 단일, 3 개의 프라임 -T (3'-T) 오버행이있는 선형화 된 클로닝 벡터를 사용하여이 PCR 산물을 플라스미드 벡터로 복제합니다. PCR 산물은이 벡터와 높은 비율로 혼합됩니다.
DNA 리가 제 (T4 리가 제)가 혼합물에 추가되어 두 제품이 혼성화하고 결합 할 수 있습니다.
장점과 단점
TA 클로닝은 선형화 된 벡터에서 PCR 산물을 서브 클로닝하는 편리한 방법이며 기존 서브 클로닝 방법보다 훨씬 간단하고 빠릅니다. 이 방법은 제한 효소를 사용하지 않기 때문에 제한 효소 부위가없는 제품을 복제 할 수 있습니다.
단점은 TA 클로닝 키트가 매우 비싸서 사용이 제한된다는 것입니다. 게다가 방향성 복제가 없습니다. 따라서 반대 방향으로 복제 할 가능성이 더 큽니다.
TA 클로닝 키트
여러 제조업체에서 TA 클로닝 키트를 판매합니다. 일부는 Invitrogen, QIAGEN 및 Premier Biosoft입니다.