샘플에서 미생물의 농도를 결정하는 고전적인 방법 중 하나는 샘플을 희석하고, 플레이트에서 미생물을 성장시키고, 콜로니를 세는 것입니다. 도금 된 미생물은 하나 이상의 세포로 구성된 콜로니 형성 단위에서보고 계수 할 수있는 가시적 인 콜로니로 성장합니다. 박테리아는 플레이트 수를 사용하여 평가하는 가장 일반적인 미생물입니다. 집락 계수는 토양, 물 및 음식에서 미생물을 감지하고 계수하는 데 사용됩니다. 식민지를 계산하는 프로토콜은 정확하고 체계적인 접근 방식을 강조합니다.
샘플 희석, 도금 및 배양
한천 플레이트에 미생물 샘플을 묻히면 개별 콜로니가 서로 섞여서 셀 수없는 많은 콜로니 형성 단위를 볼 수 있습니다. 이 문제를 해결하려면 샘플을 액체 매질에 혼합하고 소량의 혼합물을 더 희석합니다. 이 과정을 6 ~ 10 회 반복합니다. 한천 플레이트에 최종 희석액을 펴고 콜로니를 계산하기 전에 4 ~ 7 일 동안 배양합니다.
수동 계산
콜로니를 세는 주요 트릭은 각 콜로니 점을 한 번 세는 것입니다. 한 가지 접근 방식은 그리드 배경에 페트리 접시를 설정하고 각 그리드 셀의 콜로니를 계산하여 모든 셀을 통해 체계적인 패턴으로 이동하는 것입니다. 페트리 접시 뒷면에 계수 된 콜로니를 표시하는 것도 도움이 될 수 있습니다. 일반적으로 적어도 세 개의 접시를 세어야합니다. 강력한 추론을 위해 30 ~ 300 개의 콜로니가 포함 된 플레이트 만 사용한다고 실험실 및 제조업체에 컨설팅 서비스를 제공하는 회사 인 Microbiology Network가 제안합니다. 계산하기에 너무 많은 콜로니가 있거나 너무 적은 콜로니가있는 플레이트는 새로운 희석으로 다시 도금해야합니다.
자동 계산
인적 오류는 수동으로 식민지를 계산하는 데 소요되는 시간을 추가합니다. 정확성과 효율성을 모두 향상 시키려면 페트리 접시를 자동화 된 콜로니 계수 장치에 놓습니다. 자동 콜로니 카운터는 접시의 이미지를 가져와 배경에서 콜로니를 분리 한 다음 알고리즘을 사용하여 접시의 콜로니를 계산합니다. 알고리즘은 둘 이상의 콜로니가 가장자리에 닿을 때 콜로니를 구별하는 데 어려움을 겪을 수 있으므로 이것은 지속적인 소프트웨어 개발 영역입니다.
계산을 더 복잡하게 만들기
식민지 수에서 미생물 밀도를 계산하는 정확도에는 몇 가지 제한이 있습니다. 집락 형성 단위는 단일 세포, 세포 사슬 또는 전체 세포 덩어리 일 수 있습니다. 가정은 집락이 하나의 세포를 나타내므로 집락 수에서 계산 된 농도가 낮을 수 있습니다. 다른 미생물은 다른 성장 조건이 필요하며, 플레이트의 콜로니는 배양 조건 하에서 해당 성장 배지에서 번성하는 미생물만을 나타냅니다. 또한 집락 계수는 죽은 세포를 등록하지 않으므로 원래 샘플의 세포 농도가 필요할 때 중요한 고려 사항입니다.
