박테리아는 세균 한천으로 알려진 고체 배지에서 배양 접시에서 성장하며, 여기에서 융기 된 원형 식민지가 형성됩니다. 개별 세균 세포와 달리, 집락은 육안으로 볼 수있을만큼 충분히 큰 세균 그룹입니다. 박테리아 성장은 얼마나 많은 콜로니가 존재하는지 간단히 관찰하여 측정 할 수 있습니다. 그러나 더 정량적 방법에는 계수 챔버 또는 더 자주 실행 가능한 플레이트 계수의 사용이 포함됩니다. 후자는 다양한 성장 조건의 영향과 같은 정성적인 정보를 제공하기 때문에 가장 자주 사용됩니다. 페트리 접시에는 수십억 개의 박테리아가있을 수 있으므로 먼저 측정하려면 샘플을 희석하여 콜로니 수를 계산해야합니다.
시험관에서 시작 세균 배양액 10 마이크로 리터를 희석 배지 90 마이크로 리터에 추가합니다. 튜브의 뚜껑을 단단히 닫고 부드럽게 소용돌이 쳐 균일 한 혼합물을 얻습니다. 이제 샘플은 원래 농도의 1/10입니다.
이 새 샘플 10 마이크로 리터를 희석 배지 90 마이크로 리터가 들어있는 새 시험관에 옮겨 다시 섞습니다. 다시 한 번 결과는 샘플이 더 희석되어 원래 농도의 100 분의 1이됩니다. 원래 샘플이 10으로 희석 될 때까지 이것을 여러 번 반복합니다.4 그리고 1010 타임스. 각 튜브에 올바른 희석액 (예: 10)이 표시되어 있는지 확인하십시오.-1, 10-2 등등.
마지막 희석액 10 마이크로 리터를 한천 플레이트에 분배합니다. 확산 가장자리를 사용하여 한천 플레이트의 전체 표면에 박테리아 용액을 배포합니다. 두 개의 접시에 대해 이것을 반복하십시오. 비교를 위해 다른 수준의 희석으로 이러한 단계를 수행하는 것도 일반적입니다. 접시 바닥에 라벨을 붙이십시오. 각 플레이트의 뚜껑을 교체하고 한천 플레이트를 화염 아래의 실험실 벤치 또는 인큐베이터에서 몇 분 동안 건조시킵니다. 박테리아 균주에 적합한 온도로 설정되어야하는 인큐베이터에 플레이트를 놓습니다. 12 ~ 16 시간 동안 성장하도록 둡니다.
콜로니는 16 시간 후에 볼 수 있어야합니다. 그러나 일부 유전자 변형은 더 오래 걸릴 수 있습니다 (예: 발색). 콜로니가 관찰되면 플레이트를 꺼내서 30 ~ 300 개의 콜로니가있는 것을 찾으십시오. 영구 마커를 사용하여 한천을 통해 식민지가 보이는 곳마다 페트리 접시의 바닥 (뚜껑이 아닌 한천이있는 쪽)에 점을 놓습니다. 각 마커 점을 세십시오. 각 요리에 대해 반복합니다.
이 실험을 위해 시작 배양에서 박테리아의 양을 측정하려면 두 곳에서 계산에서 희석을 반대로해야합니다. 첫째, 시험관에서 1 마이크로 리터를 꺼내 페트리 접시에 넣었을 때 희석 된 시료의 10 분의 1을 채취 했으므로 모든 것을 10으로 곱해야 역전됩니다. 또한 시험관의 희석 계수가 예를 들어 10-7, 콜로니 수에 10을 곱해야합니다.7 희석 효과를 되돌리려면 계산의 지수에서 음수 부호를 제거하기 만하면됩니다. 공식을 사용하십시오.
[카운팅 된 콜로니 수] × 10 × [원래 농도에 도달하기 위해 샘플을 곱해야하는 횟수: 예: 105] = 시작 배양 밀리 리터당 콜로니 형성 단위 (CFU)의 수. 이것은 페트리 접시의 박테리아 성장입니다.
