Kcat을 계산하는 방법

효소 분석의 첫 번째 테스트 튜브의 데이터에 대한 제품 농도 대 시간 차트를 플로팅합니다. 참고: 가로 축은 "시간"이고 세로 축은 "제품 농도"여야합니다.

섹션 1, 1 단계에서 플로팅 한 데이터 포인트에 대한 선형 회귀선을 계산합니다. Excel 및 그래프 계산기는이 선형 모델을 쉽게 결정할 수 있지만 회귀 추정치를 도출 할 수 있습니다. 인접한 데이터 포인트 간의 제품 농도 차이를 시간 차이로 나누어 선의 기울기.

섹션 1, 2 단계의 선형 회귀선 기울기를 "초기 반응 속도 (Vo)"로 기록합니다. 참고: 회귀선 모델 "[제품 농도] = m [시간] + b"에서 계수 "m"은 경사.

분석의 나머지 테스트 튜브에 대해 1, 2 및 3 단계를 반복합니다.

각 테스트 튜브에 대한 기질 농도의 역 대 초기 반응 속도의 역을 플로팅합니다 (섹션 1, 4 단계). 예를 들어, 초기 기질 농도가 50 마이크로 몰 인 테스트 튜브의 초기 속도가 (uM)은 80 uM / s, 역은 기질 농도의 경우 1/50 uM, 초기 값의 경우 1/80 uM / s입니다. 속도. 참고: 역 기판 농도는 수평 축에 있어야하고 역 초기 속도는 수직 축에 있어야합니다.

참고: 기질 농도는 수평 축에 있어야하고 초기 반응 속도는 수직 축에 있어야합니다.

섹션 2, 1 단계에서 그린 차트에 대한 선형 회귀선을 결정합니다. 참고: 회귀선에 대한 y- 교차를 알아야하기 때문에 다음에서 점을 입력해야합니다. 섹션 2, 1 단계를 Excel 또는 그래프 계산기로 전환하고 기본 제공 회귀 모델링 사용 기능.

1을 선형 회귀선의 y- 교차로 나눕니다. 이것은 효소에 대한 최대 반응 속도 인 Vmax의 역값을 제공합니다. 참고: 선형 회귀 모델이 "[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + b"형식을 취하는 경우 "b"값은 y 교차가됩니다. Vmax의 역을 계산하려면 1을 "b"로 나눕니다.

1을 섹션 2, 3 단계의 결과로 나누어 Vmax의 실제 값을 계산합니다.

원래 분석에서 효소의 농도를 결정합니다 (원시 데이터 참조). 참고: 효소 농도는 모든 시험관에서 동일합니다. 기질 농도 만 분석에서 다릅니다.

Vmax (섹션 2, 4 단계)를 효소 농도 (섹션 2, 5 단계)로 나눕니다. 결과는 Kcat의 가치입니다.