რა არის თვალის მიდევნების ფუნქცია ლარის ელექტროფორეზში?

ლარის ელექტროფორეზი არის საყოველთაოდ გამოყენებული ლაბორატორიული ტექნიკა, რომელსაც აქვს მრავალი პრაქტიკული პროგრამა, მათ შორის დნმ თითის ანაბეჭდისა და გენომის თანმიმდევრობით. პროცესი მოიცავს გამოყოფას დნმ ფრაგმენტები ელექტრული დენის გამოყენებით, ფილტრაციის გელის საშუალებით მოლეკულური მოძრაობის სიჩქარის თვალთვალის დროს.

უფერო დნმ-ის ნიმუშებში ლურჯი ან ნარინჯისფერი თვალთვალის საღებავის დამატება საშუალებას გაძლევთ ნახოთ თქვენი ნიმუში და მიიღოთ ინფორმაცია იმის შესახებ, თუ როგორ მოძრაობენ დნმ-ის მოლეკულები ელექტროფორეზის დროს. იდენტიფიკაცია ემყარება მოლეკულების მიგრაციის შემდეგ ლარზე დნმ ზოლების ზომას.

ლარის ელექტროფორეზი დნმ-ის ფრაგმენტებს გელის საშუალებით ახდენს ელექტრული დენის გამოყენებით დნმ-ის მოლეკულების იზოლირებისა და იდენტიფიკაციისთვის ზომისა და ელექტრული მუხტის მიხედვით. გელი ხშირად მზადდება აგაროზის ფხვნილი - პოლისაქარიდი ზღვის მცენარეები.

აგაროზას ემატება წყლისა და მარილის ბუფერულ ხსნარს, ხოლო ნარევს აცხელებენ და აცივებენ ფოროვანი გელით, რომელიც მოქმედებს როგორც ფილტრაციის მატრიცა, ელექტროფორეზის პროცედურის დროს. შემდეგ გელი მოთავსებულია ელექტროფორეზის განყოფილებაში და დაფარულია ბუფერული ხსნარით, რომელიც ატარებს

ხსნარები, რომლებიც შეიცავს დნმ-ს და დატვირთვის საღებავებს, პიპეტურად გადადის გელში მცირე ჭებში, რომელიც უნდა გაკეთდეს გელის მომზადების დროს. საღებავებიდაგეხმარონათლად იხილეთ ნიმუში რომ თქვენ დაამატებთ გელის ჭაბურღილებს, რომლებიც მდებარეობს ელექტროფორეზის ერთეულის ნეგატიურ ელექტროდთან ახლოს.

პოზიტიური ელექტროდი მდებარეობს მოპირდაპირე ბოლოს. პირველ ჭაბურღილში მოთავსებულია დნმ – ის ფრაგმენტების ცნობილი სტანდარტი, რომელიც შექმნის დნმ – ის ზოლების კიბეს შედარებისა და იდენტიფიკაციის მიზნით.

დნმ-ის მოლეკულების ფოსფატის ხერხემალი დნმ-ს ნეგატიურ მუხტს აძლევს. მოპირდაპირეები იზიდავს, შესაბამისად, დნმ-ის მოლეკულები იზიდავს პოზიტიურ ელექტროდს და იწყებს მოძრაობას, ან "მიგრაციას", ელექტროენერგიის ჩართვისას.

მცირე ზომის დნმ-ის ფრაგმენტები უფრო სწრაფად იმოძრავებს, ვიდრე უფრო დიდი ფრაგმენტები, რადგან მათ ნაკლები წინააღმდეგობა ექმნებათ, რადგან ისინი გელის ფოროვანი მატრიქსში გადადიან. მსგავსი ზომის დნმ – ის ფრაგმენტები ქმნის ლარის დნმ – ს ლარს.

დნმ არის უფერო, ამიტომ დასძინა თვალყურს ადევნებს საღებავებს ნიმუში დაგეხმარებათ მოძრაობის სიჩქარის განსაზღვრა ელექტროფორეზის დროს ლარში სხვადასხვა ზომის ცილის მოლეკულები. დატვირთვის საღებავების მაგალითები, რომლებიც დნმ-ის ნიმუშთან ერთად მოძრაობენ, მოიცავს ბრომფენოლილურჯი და ქსილენ ციანოლი.

არჩეული საღებავი არ უნდა იყოს რეაქტიული ან შეცვალოს დნმ. ბრომფენოლის ლურჯი არის საღებავი, რომელიც გამოიყენება მცირე ზომის დნმ – ის ძაფების დასადგენად, რომელიც შეიცავს 400 ფუძის წყვილს, ხოლო ქსილენ ციანოლი უკეთესია დნმ – ის უფრო მსხვილი ძაფებისთვის, რომელსაც აქვს 8000 ფუძის წყვილი. არჩეული საღებავი არ უნდა იყოს რეაქტიული ან შეცვალოს დნმ.

დნმ-ის ნიმუშის მოსმენით ელექტროფორეზი, თქვენ დაგჭირდებათ გლიცერინის და წყლის დამატება საღებავებთან ერთად. გლიცეროლი არის მძიმე, სიროფიანი ნივთიერება, რომელიც უფრო მეტ სიმკვრივეს ანიჭებს დნმ-ის ნიმუშს, სანამ იგი გელის ფურცლის ერთ ბოლოს ჭებში შევა.

გლიცეროლის გარეშე, დნმ-ის ნიმუში დაიშლება, ნაცვლად იმისა, რომ ჩაიძიროს და წარმოიქმნას ფენა ჭაში, როგორც ეს უნდა გაკეთდეს დნმ-ის კიბის შესაქმნელად.

ნატრიუმის დოდეცილ სულფატის პოლიაკრილამიდის გელის ელექტროფორეზი (SDS PAGE) არის ტექნიკა, რომელიც გამოყოფს ცილებს და ამინომჟავებს, რომლებიც უფრო მცირე და უფრო რთულია, ვიდრე ხაზოვანი დნმ-ის მოლეკულები. ელექტროფორეზისთვის აგაროზას გელის ნაცვლად გამოიყენება პოლიაქრილამიდი (SDS PAGE გელი).

ბრომოფენოლის ლურჯი (BPB) ემატება ნიმუშის ბუფერს, როგორც თვალთვალის საღებავი რომელიც მოძრაობს ცილების გამოყოფის იმავე მიმართულებით და გამოყოფს მათ საწინაღმდეგო ზღვარს.

დნმ-ს სავალდებულო საღებავი, როგორიცაა ნარინჯისფერი ფერის ეთიდიუმის ბრომიდი შეიძლება დაემატოს ლარს ან ელექტროფორეზის ბუფერს. როგორც სახელიდან ჩანს, საღებავი დნმ-ის მოლეკულას ედება.

დიდი ყურადღება უნდა მიექცეს ამ მუტაგენური საღებავის დამუშავებას, რადგან მას შეუძლია დაერთოს დნმ-ს კანის უჯრედებში. საღებავების თვალთვალისგან განსხვავებით, ეთიდიუმ ბრომიდი ფლუორესები ნათელი ქვეშ UV შუქი, თვალსაჩინო გახდის დნმ-ს ზოლებს.