ვესტერნ ბლოტი, ანალიტიკური ტექნიკა, რომელიც გამოიყენება მოცემულ ნიმუშში კონკრეტული ცილის დასადგენად, იყენებს ფერმენტის ან ფლუორესცენციის ნიშნით პირველადი ანტისხეულების უნარს დაუკავშირდეს მის სპეციფიკურ ანტიგენს. ეს არის სამსაფეხურიანი პროცესი, რომელიც იწყება გელის ელექტროფორეზით, რასაც მოჰყვება მემბრანის გადაფარვა და ანტისხეულებით გამოკვლევა. პროტეინის გამოვლენა შეიძლება იყოს პირდაპირი ან არაპირდაპირი, ამ უკანასკნელის საშუალებით გამოიყენება ეტიკეტირებული მეორადი ანტისხეულები, რომლებიც მიმართულია პირველადის საწინააღმდეგოდ. მიუხედავად იმისა, რომ მიღებულია, როგორც ცილოვანი ანალიზის რუტინული ტექნიკა, ვესტერნ ლაქას აქვს შეზღუდვები და სარგებელი.
უპირატესობა: მგრძნობელობა
Western blot- ის სასარგებლოდ ერთ-ერთი ყველაზე დიდი არგუმენტია მისი მგრძნობელობა. იმის გამო, რომ შეუძლია სინჯში დაადგინოს არანაკლებ 0,1 ნანოგრამი ცილა, ტექნიკას შეუძლია თეორიულად გამოდგეს ადრეული დიაგნოსტიკური ეფექტური საშუალება, პაციენტის ვირუსის ან ბაქტერიების უმცირესი იმუნოგენული რეაქციის გრძნობაც კი ნიმუში. არაპირდაპირი დასავლური ლაქა კიდევ უფრო ამყარებს ამ მგრძნობელობას მეორადი ანტისხეულების შესაძლებლობისგან, გაამრავლოს ვიზუალიზაციის სისტემის მიერ გამოვლენილი სიგნალის ინტენსივობა. მეტი მგრძნობელობა ნიშნავს, რომ ტესტირებისთვის საჭიროა ნაკლები ანტისხეულები, რაც მნიშვნელოვნად ამცირებს ლაბორატორიულ ხარჯებს.
უპირატესობა: სპეციფიკა
ვესტერნ ბლოტის ტექნიკა თავის სპეციფიკურობას ორი მნიშვნელოვანი ფაქტორის წყალობით ეკუთვნის. პირველი, გელის ელექტროფორეზი ალაგებს ნიმუშს სხვადასხვა ზომის, მუხტის და კონფორმაციის ცილებად. ეს პროცესი თავისთავად უზარმაზარი ნაბიჯია გამოვლენისკენ, რადგან ლარში წარმოქმნილი ზოლები უკვე გვაწვდის ინტერესს ცილის ან პოლიპეპტიდის ზომის შესახებ. ანტისხეულების და ანტიგენების ურთიერთქმედების სპეციფიკა წარმოადგენს მეორე დიდ ფაქტორს. იმის გამო, რომ სპეციფიკური ანტისხეულები ავლენენ სპეციფიკურ ცილებს, პროცესს შეუძლია შერჩევით დაადგინოს სამიზნე ცილა, თუნდაც 300000 სხვადასხვა ცილის ნარევი.
მინუსი: მიდრეკილია ცრუ ან სუბიექტური შედეგებისკენ
მიუხედავად მისი მგრძნობელობისა და სპეციფიკისა, ვესტერნის ლაქამ შეიძლება არასწორი შედეგები გამოიწვიოს. ცრუ-დადებითი შედეგია, როდესაც ანტისხეული რეაგირებს არანიშნულ ცილასთან, რაც ხშირად ხდება ხდება მაშინ, როდესაც აივ ინფექციაზე პაციენტს აქვს ტუბერკულოზი ან პარაზიტი ინფექციები მეორეს მხრივ, ცრუ-უარყოფითი შეიძლება ადვილად წარმოიშვას, თუ უფრო დიდ ცილებს არ მიეცემა საკმარისი დრო გარსის სწორად გადასაცემად. არასათანადო დაბინძურება და დამუშავება ხშირად წარმოქმნის დახრილ, გაცვეთილ ან თუნდაც მრავალჯერადი შემსრულებლებს, რის გამოც გამოცდის შედეგები ექვემდებარება ტექნიკოსის ინტერპრეტაციას.
მინუსი: მაღალი ღირებულება და ტექნიკური მოთხოვნა
ვესტერნ ბლოტის ღირებულება წარმოადგენს ინდივიდუალური დანახარჯების დიდ კომპონენტს, რომელსაც აქვს ანტისხეულები, გამოცდილი ანალიტიკოსები და ლაბორატორიული მოწყობილობა. დელიკატური პროცესი, ვესტერნ ბლეტი მოითხოვს ყველა ნაბიჯის სიზუსტეს ნიმუშის შემადგენელი ნაწილის სათანადო იდენტიფიკაციისთვის. მცირედი შეცდომა რეაგენტის კონცენტრაციაში ან ინკუბაციის პერიოდში შეიძლება დამღუპველი იყოს მთელი პროცესისთვის. დაბოლოს, გამოვლენისა და გამოსახვისთვის საჭირო მოწყობილობა - ქიმილუმინესცენტური, ფლუორესცენტული, რადიოაქტიური ან ლაზერული გამოვლენის სისტემები - საშუალო მიკრობიოლოგიის საშუალო დანადგარისთვის შეიძლება ძალიან ძვირი ღირდეს.