როგორ ხდება დნმ-ის ნიმუშის შეგროვება და მომზადება შესასწავლად

სანამ ისინი შეძლებენ დნმ-ის თანმიმდევრობას ან გენეტიკური ინჟინერიის შეცვლას, მეცნიერებმა ჯერ უნდა იზოლირება. ეს ჩანდეს რთული ამოცანა, ვინაიდან უჯრედები შეიცავს მრავალფეროვან სხვა ნაერთებს, როგორიცაა ცილები, ცხიმები, შაქრები და მცირე მოლეკულები. საბედნიეროდ, ბიოლოგებს შეუძლიათ გამოიყენონ დნმ-ის ქიმიური თვისებები, რომ გამოიყონ დნმ ამ დამაბინძურებლებისგან და მოამზადონ იგი შემდგომი შესწავლისთვის. ამ პროცესს დნმ-ის ექსტრაქციას უწოდებენ.

უჯრედების ანალიზი

დნმ-ის მოპოვებისთვის მრავალი სხვადასხვა ტექნიკაა გამოყენებული. ინდივიდუალური ლაბორატორიის მიერ გამოყენებული დამოკიდებულია იმაზე, თუ რა ტიპის ექსპერიმენტი უნდა ჩატარდეს და რამდენად სუფთა უნდა იყოს დნმ. მეცნიერები ზოგადად იწყებენ უჯრედების შემცველი ნიმუშით - მაგალითად, ქსოვილით ან სისხლის ნიმუშით - უჯრედების გახსნას ან ლიზირებას. არსებობს უჯრედების ლიზირების მრავალფეროვანი გზა. სარეცხი საშუალების დამატება იწვევს მათ დაშლას, ისევე როგორც მაღალსიხშირული ხმის ტალღების დაქვემდებარებას. გარდა ამისა, ნიმუშის მინის მძივებთან შერევა და მისი სწრაფი ვიბრაცია ფიზიკურად გამოყოფს უჯრედებს და გამოყოფს მათ შინაარსს.

სწრაფი და ბინძური მიდგომები

თუ მაღალი სიწმინდე არ არის საჭირო, მეცნიერებს შეუძლიათ დაამატოთ ფერმენტი, რომელსაც ეწოდება პროტეინაზა K, რომ დაანგრიოს პროტეინების უმეტესი ნაწილი, შემდეგ კი გამოიყენონ ის როგორც არის. ეს ტექნიკა ძალზე ბინძურია, რადგან დამაბინძურებლების უმეტესობა ჯერ კიდევ არსებობს, ამიტომ მხოლოდ მაშინ არის შესაფერისი, თუ სიჩქარე პრიორიტეტულია და სიწმინდეს პრობლემა არ წარმოადგენს. კიდევ ერთი სწრაფი და ბინძური მიდგომაა ცილების მოცილება მარილის კონცენტრაციის გაზრდით მარილების დამატებით, როგორიცაა ამონიუმი ან კალიუმის აცეტატი, რომ აიძულონ ცილები დააჩქარონ. ეს ტექნიკაც საკმაოდ ბინძურია, რადგან კიდევ ბევრი დამაბინძურებელი ნივთიერებაა.

ფენოლ-ქლოროფორმის ექსტრაქცია

კიდევ ერთი მიდგომაა უჯრედების ლიზირება სარეცხი საშუალებით, შემდეგ კი ხსნარის შერევა იზოამილის სპირტთან, ქლოროფორმთან და ფენოლთან. ამის შემდეგ გამოსავალი გამოყოფს ორ ფენად. ცილები მთავრდება ზედა ორგანულ ფენაში, ხოლო დნმ რჩება ქვედა წყალში. ეს ტექნიკა მოითხოვს მარილის კონცენტრაციისა და pH- ის ფრთხილად კონტროლს კარგი შედეგის მისაღწევად. ეს შრომატევადია და, როგორც ფენოლი, ასევე ქლოროფორმა ძალიან ტოქსიკური ქიმიკატებია. შესაბამისად, მაშინ, როდესაც ფენოლ-ქლოროფორმის ექსტრაქციები ჩვეულებრივ ხასიათს ატარებდა, ბოლო წლების განმავლობაში სხვა ტექნიკა უფრო პოპულარული გახდა.

ანიონ-გაცვლითი ქრომატოგრაფია

ანიონ-გაცვლითი ქრომატოგრაფია გვთავაზობს უფრო მაღალ სიწმინდეს და უფრო თანმიმდევრულ შედეგებს, ვიდრე ფენოლ-ქლოროფორმის ექსტრაქცია. მილი ან სვეტი შეფუთულია მცირე ნაწილაკებით, რომლებზეც დადებითად დამუხტული ადგილებია, სადაც უარყოფითად დამუხტულ მოლეკულას ან ანიონს შეუძლია შეკავშირება. დნმ უკავშირდება ამ ანიონ-გაცვლით ადგილებს, ხოლო სხვა დამაბინძურებლები, როგორიცაა ცილები და RNA, ირეცხება სვეტიდან. მოგვიანებით, მარილით მდიდარი ხსნარი გამოიყენება სვეტიდან დნმ-ის მოსაზიდად.

კომპლექტები

დნმ-ის გასუფთავების ყველაზე სწრაფი და ალბათ ყველაზე საიმედო ტექნიკა არის სპეციალურად წარმოებული ნაკრების გამოყენება. ეს ნაკრები შეიცავს სილიციუმის გელის მემბრანებს მილში. დნმ ემაგრება მემბრანს, ხოლო სხვა დამაბინძურებლების გარეცხვა ხორციელდება სპეციალურად მომზადებული მარილის ხსნარების გამოყენებით, რომლებიც მოყვება კომპლექტს. დაბოლოს, დნმ ირეცხება სვეტისგან დაბალი მარილის ხსნარით. ეს ნაკრები არის სწრაფი, მარტივი და გთავაზობთ რეპროდუქციულ შედეგებს.

აბსორბცია

მას შემდეგ, რაც დნმ იზოლირდება და განახლდება pH კონტროლირებადი ბუფერულ ხსნარში, ბოლო ეტაპია მისი სიწმინდის შემოწმება. ამის მარტივი და მოსახერხებელი გზაა შემოწმება, თუ რამდენს ულტრაიისფერი სინათლე შთანთქავს 260 და 280 ნანომეტრის ტალღის სიგრძეზე. აბსორბცია 260 ნანომეტრზე დაყოფილია შთანთქმის 280 ნანომეტრი უნდა იყოს 1.8 თუ დნმ სუფთაა. აბსორბციის გაზომვა 260 ნანომეტრით ასევე საშუალებას გაძლევთ განსაზღვროთ დნმ-ის კონცენტრაცია.

  • გაზიარება
instagram viewer