ვესტერნ ბლოტინგის უარყოფითი მხარეები

ვესტერნ ბლეტი ერთ-ერთი ყველაზე გავრცელებული პროცედურაა ბიოქიმიურ ლაბორატორიებში. ძირითადად, ის გამოყოფს ცილებს ნიმუშისაგან ზომის მიხედვით, შემდეგ ტესტებს ანტისხეულების გამოყენებით, იმის დასადგენად, არის თუ არა მოცემული ცილა. ეს სასარგებლოა არა მხოლოდ კვლევაში, არამედ სამედიცინო ან დიაგნოსტიკურ ლაბორატორიებში; აივ და ლაიმის დაავადების ტესტები, მაგალითად, მოიცავს ფერმენტთან დაკავშირებული იმუნოსორბენტის ანალიზს (ELISA), რასაც მოჰყვება ვესტერნ ბლატი, თუ ELISA დადებითია. მიუხედავად პოპულარობისა, Western blotting- ს აქვს რამდენიმე უარყოფითი მხარე.

დასავლური კლასიკური ბლოკები არა რაოდენობრივია. სხვა სიტყვებით რომ ვთქვათ, მიუხედავად იმისა, რომ მათ მკითხველებს შეუძლიათ განუცხადონ, არის თუ არა კონკრეტული ცილა, მათ არ აძლევენ შესაძლებლობას, განსაზღვრონ რამდენი პროტეინია. ზოგი ბიოტექნიკური კომპანია ყიდის კომპლექტებს, რომლებიც მკვლევარებს ან ლაბორატორიებს საშუალებას აძლევს შეაფასონ რაოდენობის ოდენობა ცილა, რომელიც სტანდარტული მრუდის გამოყენებით არსებობს - მაგრამ ეს მუშაობს მხოლოდ იმ შემთხვევაში, თუ იგივე ცილის სუფთა ნიმუშებია ხელმისაწვდომია უფრო მეტიც, ცილის მოლეკულური წონა შეიძლება შეფასდეს მხოლოდ ვესტერნ ბლოტით, ვიდრე განისაზღვროს ზუსტად ისე, როგორც მასობრივი სპექტრომეტრიით.

Western blot შეიძლება ჩატარდეს მხოლოდ იმ შემთხვევაში, თუ ხელმისაწვდომია პირველადი ანტისხეულები პროტეინის საწინააღმდეგოდ. მიუხედავად იმისა, რომ ბიოტექნიკური კომპანიებისგან ანტისხეულები მიიღება სხვადასხვა ცილებისთვის, ისინი იაფი არ არის; თუ მოცემული ცილისთვის პირველადი ანტისხეულები არ არის ხელმისაწვდომი, შეუძლებელია Western blot- ის ჩატარება ამ კონკრეტული ცილის მოსაძებნად. უფრო მეტიც, მკვლევარებს შეიძლება სურთ დაადგინონ შეიცვალა თუ არა ცილა რაიმე ფორმით - არის თუ არა იგი ფოსფორილირებული (ჰქონდა ფოსფატის ჯგუფი მასზეა დამაგრებული), მაგალითად - და Western blot ტექნიკით მათ სჭირდებათ ანტისხეულები, რომლებიც სპეციფიკურია მოდიფიცირებულთათვის ცილა.

დასავლეთის ბლოტის სწორად შესრულება და კარგი შედეგის მიღება შეიძლება რთული იყოს, ამიტომ პერსონალი კარგად უნდა იყოს მომზადებული. ამაში, როგორც სხვა რამეებში, გამოცდილება, ალბათ, საუკეთესო რეპეტიტორია. გამოცდილი ტექნიკოსისთვისაც კი, დასავლეთის ლაქა შრომატევადია. ექსპერიმენტის გელის ელექტროფორეზის ნაწილი, ჩვეულებრივ, ერთიდან ორ საათამდე გაგრძელდება. სხვა დავალებების შესრულება შეიძლება, სანამ ლარი მუშაობს, რა თქმა უნდა, მაგრამ შედეგის მისაღწევად ექსპერიმენტს საკმაოდ დიდი დრო სჭირდება.

ანტისხეულები შეიძლება ზოგჯერ ავლენენ სამიზნე სავალდებულო სავალდებულოობას, რამაც შეიძლება უფრო ცუდი შედეგი გამოიწვიოს. უფრო მეტიც, Western blotting- ით თქვენ იყენებთ ანტისხეულს კონკრეტული ცილის საწინააღმდეგოდ, ასე რომ თქვენი შედეგები გეტყვით მხოლოდ იმ შემთხვევაში, თუ ეს ცილა იყო. მაღალი რეზოლუციის მასის სპექტრომეტრია, პირიქით, ავლენს ნიმუშში არსებულ ყველა ცილას და განსხვავებით კლასიკური ვესტერნ ბლეტისგან, ეს რაოდენობრივია. რა თქმა უნდა მნიშვნელოვანია გვახსოვდეს, რომ მასობრივი სპექტრომეტრია ბევრად უფრო ძვირია და ასევე ტექნიკურად უფრო რთული გამოსაყენებელია დასავლურ შეღებვასთან შედარებით.