როგორ გამოვთვალოთ CFU განზავებიდან

თქვენი მასწავლებელი გაწვდის ბაქტერიების ნიმუშს და გკითხავს: რამდენი სიცოცხლისუნარიანი მიკროორგანიზმია ამ ნიმუშში? რას ნიშნავს ეს და როგორ გაერკვნენ? ერთი მეთოდი არის რიცხვის პოვნა კოლონიის წარმომქმნელი ერთეულები(CFU).

CFU გულისხმობს ნებისმიერი მიკროორგანიზმის ინდივიდუალური კოლონიების რაოდენობას, რომლებიც იზრდება ფირფიტის ფირფიტაზე. ეს მნიშვნელობა თავის მხრივ წარმოადგენს ბაქტერიების რაოდენობას, რომელთა გამრავლებაც შესაძლებელია, რადგან მათ ფირფიტაზე კოლონიები შექმნეს. არსებობს CFU ფორმულა, რომელიც მოიცავს შერჩევას.

თხევადი ნიმუში ბაქტერიების რაოდენობის დათვლა ძალიან რთულია. ისინი ძალიან ბევრია და ისინი ძალიან მცირეებიც არიან. გარდა ამისა, ზოგი მათგანი შეიძლება მკვდარი იყოს, ზოგი კი ცოცხალი, და მკვდარი არ უნდა ითვლიდეს ჯამში. თქვენ მხოლოდ გაინტერესებთ სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიები, ან ბაქტერიები, რომელთა გამრავლებაც შეიძლება. როგორ შეგიძლიათ გაერკვიოთ რამდენი ბაქტერია გაქვთ?

ისევე, როგორც თქვენ შეგიძლიათ გააკეთოთ გამოკითხვა 1000 ადამიანისთვის და გამოიყენოთ იგი 10,000 ადამიანზე იმის გასარკვევად, თუ როგორ შეიძლება ისინი იფიქრონ გარკვეულ თემაზე. შეგიძლიათ სცადოთ და აიღოთ თქვენი ორიგინალის მცირე ნაწილი, გაერკვიოთ რამდენი ბაქტერიაა ეს ნაწილი და შემდეგ გამოთვალეთ, თუ რამდენი შეიძლება ყოფილიყო ორიგინალში ნიმუში.

მოცემული ნიმუშის CFU პოვნის პროცედურა მოიცავს ამ ნიმუშის პირველ განზავებას. შემდეგ განზავებები იდება ფირფიტებზე სწორი ზრდის საშუალებით. მრავალჯერადი განზავება ხშირად კარგი იდეაა, რადგან ორიგინალი ნიმუში შეიძლება ძალიან კონცენტრირებული იყოს.

მოცემული დროის განმავლობაში ფირფიტებზე ბაქტერიების ზრდის ნებართვის შემდეგ, ინდივიდუალური კოლონიები თეფშზე ითვლიან. თუ ნიმუში ძალიან კონცენტრირებული იყო, ცალკეული კოლონიების ნაცვლად ნახავთ ბაქტერიების ზრდით დაფარულ დიდ ადგილს, რომელსაც ეწოდება a გაზონი. ეს ნიშნავს, რომ თქვენ კიდევ უნდა განზავოთ თქვენი ნიმუში და სცადოთ ხელახლა გაზრდა ისე, რომ ნახოთ ცალკეული კოლონიები.

ვინაიდან ცალკეული კოლონიები ერთი ბაქტერიიდან მოდის, რომლებიც მრავალჯერ მრავლდება, მხოლოდ ეს ითვლება CFU– ს მიმართ.

განზავების გამოყენების მაგალითი CFU გაანგარიშების მიზნით შეიძლება შემდეგნაირად გამოიყურებოდეს: პირველი, თქვენი მასწავლებლის საწყისი ნიმუშიდან აიღეთ 1 მლ და დაადეთ იგი. მეორე დღეს ხედავთ, რომ იქ არის ბაქტერიების გაზონი. ეს ნიშნავს, რომ თქვენ არ შეგიძლიათ დაითვალოთ CFU რიცხვი. შემდეგი ნაბიჯი არის განზავების გაკეთება.

პირველი, თქვენ იღებთ 1 მლ ნიმუშს და განზავებთ მას 9 მლ თხევად საშუალებებად. მას შემდეგ, რაც განზავება არის ერთი ნაწილის ნიმუში ცხრა ნაწილის გამხსნელი, იგი მოიხსენიება როგორც 1:10 განზავება. შემდეგ, თქვენ მიიღებთ 1 მლ 1:10 განზავებას და დაამატეთ იგი 9 მლ თხევად საშუალებებს. ეს განზავება არის 1: 100 განზავება. დაბოლოს, თქვენ გააკეთებთ 1: 1000 განზავებას 1 მლ 1: 100 განზავების მიღებით და 9 მლ თხევადი საშუალებების დამატებით. თითოეული განზავებისათვის ახლა თქვენ გაქვთ 10 მლ განზავებული ბაქტერიული კულტურა.

განზავების დასრულების შემდეგ, ფირფიტებზე დაადეთ 0,5 მლ განზავება. დარწმუნდით, რომ მოაწერეთ ფირფიტები, რომლებზეც განზავება იყო დაფარული.

მეორე დღეს დაბრუნდებით და ხედავთ, რომ ყველა ფირფიტაზე ცალკეული კოლონიებია. თქვენ უნდა აირჩიოთ ფირფიტა შორის 30 და 300 კოლონია. თქვენ ხედავთ, რომ 1: 1000 განზავების ფირფიტას აქვს 10 კოლონია, ეს ნიშნავს, რომ თქვენ უფრო გაზავეთ ნიმუში. ეს ფირფიტა არ გამოდგება CFU- ს მოსაძებნად.

1:10 განზავების ფირფიტს აქვს მრავალი კოლონია, შესაძლოა 300-ზე მეტი. ამ შემთხვევაში შეგიძლიათ გადახვიდეთ 1: 100 ფირფიტაზე. თქვენ თვლით ამ ფირფიტის კოლონიებს და აღმოაჩენთ, რომ მას 179 კოლონია ჰყავს. ეს ნიშნავს, რომ 1: 100 განზავების 0,5 მლ შეიცავს 179 CFU. რაც შეეხება ორიგინალ ნიმუშს?

ახლა, როდესაც თქვენ გაქვთ გარკვეული მონაცემები, შეგიძლიათ გააკეთოთ CFU გაანგარიშება თავდაპირველ ნიმუშიში.

1. აიღეთ თქვენი დაფარული ოდენობა (0,5 მლ) და გამრავლდით განზავების კოეფიციენტზე (0,01) და მიიღეთ 0,005. თქვენ ეს უნდა გააკეთოთ, რომ იპოვოთ განზავების კოეფიციენტი, რამაც თქვენი CFU რაოდენობა გამოყო. აქ, 1: 100 განზავების ნახევარმა მილილიტრმა საშუალებას გაძლევთ დაითვალოთ CFU.

2. დაყავით CFU განზავებისგან (179) ნაბიჯი 1-ის (0.005) შედეგის მიხედვით 35,800 CFU.

ეს ნიშნავს, რომ 1 მლ ორიგინალი ნიმუში, რომელიც განზავებულია, შეიცავს 35,800 CFU- ს. ამის თქმის კიდევ ერთი გზაა იმის თქმა, რომ თავდაპირველ ნიმუშს აქვს 35,800 CFU / მლ.

CFU შესანიშნავი საშუალებაა იმის დასადგენად, რამდენი ბაქტერია, სოკო ან ნებისმიერი მიკროორგანიზმია მოცემულ ნიმუშში. აქ აღწერილი დაფარვის მეთოდი განსაკუთრებით გამოსადეგია ძალიან კონცენტრირებული ნიმუშებისთვის ან ორგანიზმებისთვის, რომლებიც თხევადი კულტურის პირობებში კარგად არ იზრდება.