როგორ ითვლიან კოლონიებს მიკრობიოლოგიაში

ნიმუშში მიკრობების კონცენტრაციის დადგენის ერთ-ერთი კლასიკური გზაა ნიმუშის განზავება, მიკრობების ზრდა ფირფიტებზე და კოლონიების დათვლა. მოოქროვილი მიკრობები იზრდება კოლონიის წარმომქმნელი ერთეულიდან, რომელიც შედგება ერთი ან მეტი უჯრედისგან, ხილულ კოლონიად, რომლის დანახვა და დათვლა ხდება. ბაქტერიები ყველაზე გავრცელებული მიკრობია ფირფიტების რაოდენობის შესაფასებლად. კოლონიების რაოდენობას იყენებენ ნიადაგში, წყალსა და საკვებში მიკრობების დასადგენად და დასათვლელად. კოლონიების დათვლის პროტოკოლები ხაზს უსვამენ ზუსტ და მეთოდურ მიდგომას.

თუკი აგარის ფირფიტაზე მიკრობის ნიმუშს უბრალოდ წაუსვამთ, იმდენ კოლონიას წარმოქმნის დანაყოფს ნახავთ, რომ ცალკეული კოლონიები ერთმანეთში აირია და მათი დათვლა შეუძლებელი გახდება. ამ პრობლემის გადასაჭრელად, შეურიეთ ნიმუში თხევად გარემოში, აიღეთ მცირე რაოდენობით ამ ნარევიდან და კიდევ უფრო გაზავეთ. გაიმეორეთ ეს პროცესი ექვს – 10 – ჯერ. საბოლოო განზავება გაავრცელოთ აგარის ფირფიტაზე და შეინარჩუნეთ ინკუბაცია ოთხიდან შვიდი დღის განმავლობაში, სანამ კოლონიებს დაითვლით.

კოლონიების დათვლის ძირითადი ხრიკია თითოეული კოლონიის წერტილის ერთხელ დათვლა. ერთი მიდგომაა Petri კერძის დაყენება ქსელის ფონზე და კოლონიების დათვლა თითოეულ ქსელის უჯრედში, მეთოდური ფორმით გადაადგილება ყველა უჯრედში. გამოთვლილი კოლონიების მონიშვნა პეტრის კერძის უკანა მხარეს ასევე შეიძლება სასარგებლო მიდგომა იყოს. საერთოდ, მინიმუმ სამი თეფშის დათვლა დაგჭირდებათ; გამოიყენეთ მხოლოდ ფირფიტები, რომლებიც შეიცავს 30-დან 300 კოლონიას, ძლიერი დასკვნების გაკეთების მიზნით, ვარაუდობს მიკრობიოლოგიის ქსელი, ფირმა, რომელიც საკონსულტაციო მომსახურებას უწევს ლაბორატორიებსა და მწარმოებლებს. თეფშები კოლონიებით, რომლებიც ძალზე მრავალრიცხოვანია დასათვლელად ან ძალიან ცოტა კოლონიები უნდა გადაიტანოთ ახალი განზავებიდან.

ადამიანის შეცდომა ემატება კოლონიების ხელით დათვლაში ჩართულ დროს. სიზუსტისა და ეფექტურობის გასაუმჯობესებლად, მოათავსეთ Petri კერძი ავტომატიზირებული კოლონიების მრიცხველში. კოლონიების ავტომატური მრიცხველები იღებენ კერძის გამოსახულებას, გამოყოფენ კოლონიებს ფონიდან და შემდეგ იყენებენ ალგორითმს თეფშზე კოლონიების დასათვლელად. ალგორითმებს შეიძლება ჰქონდეთ სირთულეები კოლონიების დიფერენცირებისას, როდესაც ორი ან მეტი კოლონია ეხება კიდეებს, ამიტომ ეს არის პროგრამული უზრუნველყოფის მიმდინარე განვითარების არე.

კოლონიების რიცხვიდან მიკრობების სიმკვრივის გაანგარიშების სიზუსტეს აქვს გარკვეული შეზღუდვები. კოლონიის წარმომქმნელი ერთეულები შეიძლება იყოს ერთი უჯრედი, უჯრედების ჯაჭვი ან უჯრედების მთელი გროვა. დაშვება არის ის, რომ კოლონია წარმოადგენს ერთ უჯრედს, ამიტომ კოლონიების რიცხვიდან გამოანგარიშებული კონცენტრაციები შეიძლება იყოს დაბალი. სხვადასხვა მიკრობებს ზრდის განსხვავებული პირობები სჭირდებათ და კოლონიები ფირფიტაზე მხოლოდ იმ მიკრობებს წარმოადგენენ, რომლებიც ზრდის ამ საშუალებებს ინკუბაციის პირობებში. გარდა ამისა, კოლონიების დათვლისას არ დარეგისტრირდება მკვდარი უჯრედები, რაც მნიშვნელოვანია, როდესაც საჭიროა უჯრედების კონცენტრაცია თავდაპირველ ნიმუშიში.