როგორ გავზომოთ ბაქტერიული ზრდა პეტრის კერძებში

ბაქტერიები იზრდება პეტრის კერძებში მყარ გარემოზე, რომელიც ცნობილია როგორც ბაქტერიული აგარი, სადაც წარმოქმნილია წრიული კოლონიები. ინდივიდუალური ბაქტერიული უჯრედისგან განსხვავებით, კოლონია არის ბაქტერიების ჯგუფი, რომლებიც საკმარისად დიდია და შეუიარაღებელი თვალით ჩანს. ბაქტერიების ზრდის გაზომვა შესაძლებელია მარტივი დაკვირვებით, თუ რამდენი კოლონია იმყოფება; ამასთან, უფრო რაოდენობრივი მეთოდები მოიცავს თვლემის პალატის გამოყენებას, ან უფრო ხშირად, სიცოცხლისუნარიან ფირფიტებს. ეს უკანასკნელი ყველაზე ხშირად გამოიყენება, რადგან ის ასევე გთავაზობთ ხარისხობრივ ინფორმაციას, როგორიცაა ზრდის სხვადასხვა პირობების ეფექტი. ვინაიდან პეტრის თეფშში შეიძლება იყოს მილიარდობით ბაქტერია, გაზომვა ჯერ მოითხოვს ნიმუშის განზავებას ისე, რომ შესაძლებელი იყოს კოლონიების რაოდენობის დათვლა.

სინჯარაში დაამატეთ საწყისი მიკროლიტრი 10 მიკროლიტრს 90 მიკროლიტრ გამხსნელ გარემოში. მჭიდროდ დახურეთ მილის სახურავი და ნაზად მორევით, რომ მიიღოთ ერთგვაროვანი ნაზავი. ახლა ნიმუში არის მისი თავდაპირველი კონცენტრაციის მეათედი.

ამ ახალი ნიმუშის 10 მიკროლიტრი გადაიტანეთ ახალ სინჯარაში, რომელიც შეიცავს 90 მიკროლიტრს გამხსნელ გარემოში, ისევ აურიეთ. კიდევ ერთხელ ვიტყვი, რომ შედეგი განზავდება ნიმუში - ეს იქნება მისი თავდაპირველი კონცენტრაციის მეასედი. გაიმეორეთ ეს რამდენჯერმე, სანამ ორიგინალი ნიმუში არ განზავდება 10-ს შორის

instagram story viewer
4 და 1010 ჯერ დარწმუნდით, რომ თითოეული მილის ეტიკეტირებულია სწორი განზავებით, მაგალითად, 10-1, 10-2 და ასე შემდეგ.

ბოლო განზავების 10 მიკროლიტრი გაანაწილეთ აგარის ფირფიტაზე. გავრცელების პირას გამოიყენეთ, ბაქტერიული ხსნარი გადაანაწილეთ აგარის ფირფიტის მთელ ზედაპირზე. გაიმეორეთ ეს კიდევ ორი ​​თეფშისთვის. ასევე ჩვეულებრივია ამ ნაბიჯების განზავების სხვა დონის შესრულება შედარებისთვის. დარწმუნდით, რომ ფირფიტების ფსკერზე შეაფასეთ. შეცვალეთ სახურავები თითოეულ ფირფიტაზე და გააჩერეთ აგარის ფირფიტები რამდენიმე წუთის განმავლობაში, ან ლაბორატორიის სკამზე, ან ალის ქვეშ, ან ინკუბატორში. ფირფიტები მოათავსეთ ინკუბატორში, რომელიც უნდა დადგეს ბაქტერიების შტამის შესაბამის ტემპერატურაზე. დატოვეთ 12–16 საათის განმავლობაში.

კოლონიები უნდა ჩანდეს 16 საათის შემდეგ; ამასთან, ზოგიერთ გენეტიკურ მოდიფიკაციას შეიძლება უფრო მეტი დრო დასჭირდეს (მაგალითად, ფერის განვითარება). როდესაც კოლონიები შეინიშნება, აიღეთ ფირფიტები და იპოვნეთ 30 – დან 300 – მდე კოლონია. მუდმივი მარკერის გამოყენებით, განათავსეთ წერტილი პეტრის თეფშის ძირში - მხარე აგართან და არა სახურავით - იქ, სადაც კოლონია ჩანს აგარის საშუალებით. დათვალეთ თითოეული მარკერის წერტილი. გაიმეორეთ თითოეული კერძისთვის.

ამ ექსპერიმენტის საწყის კულტურაში ბაქტერიების რაოდენობის გასაზომად, გაანგარიშებით საჭიროა განზავების შეცვლა, ორ ადგილას. პირველ რიგში, როდესაც სინჯის მილისგან ერთი მიკროლიტრი წაიღეთ პეტრის თეფში ჩასასმელად, გაზავებული ნიმუშის ერთი მეათედი აიღეთ, ასე რომ თქვენ უნდა გაამრავლოთ ყველაფერი 10-ზე, ამის საწინააღმდეგოდ. გარდა ამისა, თუ სინჯარაში განზავების ფაქტორი იყო, მაგალითად, 10-7, მაშინ კოლონიების რაოდენობა უნდა გამრავლდეს 10-ით7 განზავების ეფექტის შეცვლის მიზნით. უბრალოდ ამოიღეთ უარყოფითი ნიშანი ექსპონენტიდან გამოთვლებში. გამოიყენეთ ფორმულა:

[კოლონიების რაოდენობა] × 10 × [რამდენჯერ უნდა გამრავლდეს ნიმუში თავდაპირველ კონცენტრაციამდე მისასვლელად: მაგალითად, 105] = კოლონიის წარმომქმნელი ერთეულების რაოდენობა (CFU) თითო მილილიტრზე დაწყებული კულტურა. ეს არის თქვენი პეტრის კერძების ბაქტერიული ზრდა.

Teachs.ru
  • გაზიარება
instagram viewer